$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.
1. Laparotomia
- Znieczulenie zwierząt za pomocą ksylazyny (10 mg/kg) i roztworu ketaminy (80 mg/kg), podskórnie (0,1 ml/10 g masy ciała) za pomocą strzykawki o pojemności 1 ml i igły 13 x 0,45 mm 26 G 1/2. Sprawdź, czy głębokość znieczulenia jest wystarczająca, ściskając palec u nogi. Kontroluj temperaturę ciała za pomocą podgrzewanych wkładek. Upewnij się, że wszystkie materiały chirurgiczne są sterylne.
- Oczyść okolice brzucha 5% roztworem jodu powidonu i za pomocą trymera usuń włosy między klatką piersiową a dolną częścią brzucha (około 2cm2). Oczyść obszar operacyjny 70% alkoholem.
- Unieruchom zwierzę na tablicy operacyjnej za pomocą taśmy chirurgicznej. Nożyczkami przeciąć 5 mm skóry w poziomie, w górnej części brzucha i 1 cm poniżej wyrostka mieczykowatego. Powtórz cięcie na otrzewnej. Spowoduje to laparotomię z minimalnym odsłonięciem ubytku.
2. Lokalizowanie i odsłanianie trzustki
- Za pomocą retraktora pociągnij wątrobę w kierunku głowy myszy, ~1 cm od jelita.
- Zlokalizuj obszar trzustki, do którego zostanie wstrzyknięty taurocholan sodu (głowa trzustki). Zlokalizuj dwunastnicę w odniesieniu do wątroby - poniżej wątroby, po prawej stronie (po lewej, gdy oglądana jest mysz). Dwunastnica jest pierwszą częścią jelita cienkiego i jest połączona z końcową częścią żołądka.
- Za pomocą kleszczy podnieś wątrobę w kierunku głowy zwierzęcia i delikatnie pociągnij część jelita cienkiego. Zamocuj dwa boczne końce jelita cienkiego za pomocą szwu polipropylenowego 6-0, aby lepiej zobaczyć dystalną część wspólnego przewodu żółciowego.
3. Indukcja ciężkiego ostrego zapalenia trzustki
- Tymczasowo zatkaj proksymalny wspólny przewód żółciowy za pomocą klipsa do mikronaczyń, aby zapobiec przeciekaniu wstecznego naparu do wątroby. Wspólny przewód żółciowy można zobaczyć po wątrobowej stronie dwunastnicy, a jego połączenie z dwunastnicą będzie białe. Odsłoń narząd poza jamę brzuszną.
- Nakłuć obszar okołoampułkowy (biaława część ściany jelita cienkiego), aby uzyskać dostęp do wspólnego przewodu żółciowego za pomocą igły 0,4 mm połączonej z rurką polietylenową o średnicy 0,54 mm.
- Wykonaj tymczasowe zamknięcie dystalnego wspólnego przewodu żółciowego za pomocą 8-0 szew, aby zapobiec wyciekaniu roztworu taurocholanu sodu do dwunastnicy.
- Uruchomić pompę infuzyjną i zaprogramować infuzję 2,5% roztworu taurocholanu sodu (rozcieńczonego w 0,9% soli fizjologicznej) ze stałą prędkością 10 μl/10 g masy ciała przez 3 minuty.
- Po infuzji usuń klips do mikronaczyń, tymczasowy 8-0 szew i igłę do wstrzykiwań z przewodu żółciowego i trzustkowego w celu odtworzenia fizjologicznego przepływu żółci.
- Na koniec zszyj brzuch niechłonnym szwem polipropylenowym 6-0 monofilamentowym. Czas między laparotomią a założeniem szwu końcowego powinien wynosić maksymalnie 30 minut (patrz rycina 1).
- Po operacji zwierzęta należy umieścić w polietylenowych boksach wyłożonych wiórami drzewnymi oraz wodą i jedzeniem ad libitum.
- Myszy kontrolne należy traktować w taki sam sposób, jak myszy doświadczalne, ale upewnić się, że nalew składa się wyłącznie z soli fizjologicznej. Wykonaj zabieg chirurgiczny i infuzję roztworu soli fizjologicznej (10 ml/min, przez 3 min) w grupie kontrolnej (SHAM) w celu wyeliminowania odchylenia zapalnego spowodowanego zabiegiem chirurgicznym i kaniulacją.
- Tramadol w dawce 12,5 mg/kg mc. należy stosować podskórnie co 8 godzin, rozpoczynając po rekonwalescencji pooperacyjnej.
