Chirurgiczne odpaskowywanie aorty: procedura badania odwrotnej przebudowy lewej komory w mysim modelu zwężenia aorty

Streszczenie

Źródło: Goncalves-Rodrigues, P. et al. Badanie odwrotnej przebudowy lewej komory przez odbandżenie aorty u gryzoni. J. Vis. Exp. (2021)

Ten film demonstruje technikę odklejania aorty, która może prowadzić do odwrotnej przebudowy, aby ograniczyć postęp w kierunku niewydolności serca w modelu mysim. Po odzespoleniu znaczne zmniejszenie obciążenia następczego komór powoduje regresję przerostu komór i zwłóknienia, powodując poprawę funkcji serca.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Przygotowanie i intubacja myszy

1. Znieczulić młode myszy C57B1/J6 (20–25 g) przez inhalację 8% sewofluranu z 0,5–1,0 l/min 100%_O2 w probówce stożkowej.
2. Sprawdź głębokość znieczulenia za pomocą odruchu wycofania szczypania palca u nogi.
3. Umieść mysz w pozycji leżącej grzbietowej na pochyłej płycie i przystąp do intubacji ustno-tchawiczej.
4. Przyłóż mysz do poduszki grzewczej i szybko podłącz rurkę ustno-tchawiczą do respiratora, aby zainicjować wentylację mechaniczną.
5. Dostosuj parametry respiratora do częstotliwości 160 oddechów/min i objętości oddechowej 10 ml/kg.

2. Przygotowanie do operacji (zarówno do operacji bandingu, jak i zdejmowania bandingu)

1. Gol się i nakładaj krem do depilacji od dekoltu do połowy klatki piersiowej myszy.
2. Nałóż żel okulistyczny na oczy zwierząt, aby zapobiec wysuszeniu rogówki.
3. Umieść sondę doodbytniczą i pulsoksymetr na łapie lub ogonie, aby monitorować odpowiednio temperaturę i natlenienie krwi oraz tętno.
   UWAGA: Znieczulenie wywołuje znaczną hipotermię, dlatego ważne jest, aby podczas operacji utrzymać normalną temperaturę ciała, aby uniknąć gwałtownego spadku częstości akcji serca.
4. Utrzymuj znieczulenie sewofluranem (2,0–3,0%). Sprawdź prawidłowy poziom znieczulenia przez brak odruchu szczypania palców u stóp.
5. Umieść myszy w prawostronnym odleżynie na poduszce grzewczej i przymocuj kończyny do systemu retrakcji stabilizatora magnetycznego za pomocą taśmy, aby utrzymać zwierzę we właściwej pozycji podczas operacji (ryc. 1, ryc. 2A).
6. Zdezynfekuj klatkę piersiową myszy 70% alkoholem, a następnie roztworem jodu powidonu.

3. Chirurgia opaski aorty wstępującej

1. Za pomocą jednorazowego ostrza wykonaj małe (~0,5 cm) nacięcie skóry po lewej stronie bezpośrednio poniżej poziomu pachy i wypreparuj skórę.
2. Delikatnie rozetnij i oddziel mięsień piersiowy i inne warstwy mięśni, aż żebra staną się widoczne. Używaj cienkich kleszczy i unikaj przecinania mięśni.
3. Pod mikroskopem zidentyfikuj przestrzenie międzyżebrowe i otwórz małe nacięcie między 2. a 3. przestrzenią międzyżebrową za pomocą cienkich kleszczy.
4. Cofnij żebra, umieszczając zwijacz klatki piersiowej (Rysunek 1A).
5. Użyj małych kleszczy, aby delikatnie wypreparować i oddzielić płaty grasicy, aż aorta wstępująca stanie się widoczna.
   nuta: Bawełniane aplikatory powinny być pod ręką w przypadku krwawienia. Ciepły sterylny roztwór soli fizjologicznej należy podawać podskórnie w przypadku znacznego krwawienia (np. tętnicy sutkowej).
6. Użyj małych kleszczyków, aby delikatnie wypreparować aortę.
   UWAGA: Aortę uważa się za rozciętą, gdy wokół niej nie ma tłuszczu ani innych zrostów i można łatwo otoczyć naczynie kleszczami o małej krzywiźnie.
7. Po rozwarstwieniu aorty umieść ligaturę polipropylenową 7-0 wokół aorty, używając pomocy do podwiązywania i zakrzywionych kleszczy (ryc. 1B).
8. Umieść igłę 26 G równolegle do aorty (końcówka skierowana w stronę głowy myszy) (ryc. 1B). U myszy o masie ciała 20–25 g igła ta wywołuje powtarzalne zwężenie aorty na poziomie 65–70%.
9. Wykonaj 2 luźne węzły wokół aorty i igły 26 G za pomocą 2 kleszczyków (ryc. 1B).
10. Zaciśnij 1 węzeł i szybko potem 2 węzeł. Krótko potwierdź prawidłowe ułożenie zwężenia i szybko wyjmij igłę, aby przywrócić przepływ krwi w aorcie. Na koniec wykonaj 3^węzeł (grupa BA).
11. Ustaw grasicę i mięśnie w ich początkowej pozycji.
12. Wykonaj zabieg pozorowany identyczny z zabiegiem uciskowym, ale zachowując luźny szew wokół aorty (grupa SHAM).
13. Odetnij końce szwu i wyjmij zwijacz klatki piersiowej.
    UWAGA: Krótkie końce szwów mogą zwiększać prawdopodobieństwo poluzowania węzłów przy ucisku w aortach, podczas gdy długie końce sprawiają, że procedura odklejania jest bardziej ryzykowna, ponieważ między szwem a lewym przedsionkiem mogą wystąpić zrosty.
14. Zamknij ścianę klatki piersiowej za pomocą nici polipropylenowej 6-0 z prostym szwem przerywanym lub ciągłym, używając najmniejszej możliwej liczby szwów. Zaciśnij ostatni węzeł piersiowy z płucami napompowanymi na końcu wdechu, ściskając odpływ respiratora na 2 sekundy, aby ponownie napompować płuca.
15. Zamknij skórę szwem 6-0 jedwab/polipropylen w ciągłym wzorze szwów.
    UWAGA: Jeśli używany jest nowszy respirator, można go zaprogramować tak, aby pauzował w trybie wdechu (Konfiguracja-Zaawansowana-Pauza-Inspiracja)

4. Opieka pooperacyjna

1. Nałożyć roztwór jodu powidonu na miejsce szwu skórnego.
2. W celu uzyskania prawidłowej analgezji buprenorfinę należy podawać podskórnie w dawce 0,1 mg/kg mc., dwa razy dziennie, aż zwierzę w pełni wyzdrowieje (zwykle 2–3 dni po zabiegu).
3. Sterylną sól fizjologiczną należy wstrzykiwać dootrzewnowo, aby zapobiec odwodnieniu w przypadku znacznego krwawienia podczas operacji.
4. Wyłącz znieczulenie (bez deintubacji myszy) i poczekaj, aż zwierzę odzyska odruchy (ruchy wąsów są sygnałem budzącym) i zacznie spontanicznie oddychać.
5. Usuń kaniulę tchawicy.
6. Pozwól zwierzęciu dojść do siebie w inkubatorze w temperaturze 37 °C.
7. Po pełnym wyzdrowieniu zwierzę należy umieścić w pomieszczeniu z 12-godzinnym cyklem jasnym/ciemnym.

5. Operacja usunięcia pasa aorty

1. Siedem tygodni później wykonaj usunięcie opaski aorty u połowy zwierząt BA.
2. Powtórz wszystkie kroki od 1.1 do 2.6 wymienione powyżej.
3. Delikatnie wypreparuj tkanki, zrosty i zwłóknienia wokół aorty, aż jej zwężenie stanie się widoczne.
4. Ostrożnie wypreparuj aortę i oddziel szew od aorty. Przeciąć szew za pomocą kątowych nożyczek sprężynowych z jedną sondą (ryc. 2B).
5. Zamknij ścianę klatki piersiowej za pomocą nici polipropylenowej 6-0 z prostym szwem przerywanym lub ciągłym, stosując minimalną możliwą liczbę szwów.
   UWAGA: Spróbuj zacisnąć ostatni szew na klatce piersiowej, gdy płuca są napompowane, aby uniknąć odmy opłucnowej.
6. Zamknij skórę szwem 6-0 jedwab/polipropylen w ciągłym wzorze szwów.
7. Wykonaj wszystkie zabiegi pielęgnacji pooperacyjnej, jak wspomniano w kroku 4.

Wyniki

Rycina 1: Procedura opaski aortalnej.(A) Dostęp piersiowy do aorty wstępującej wykonany za pomocą systemu retrakcji stabilizatora magnetycznego (widoczne są 3 zwijacze). (B) Aorta wstępująca jest wyraźnie rozcięta i widoczna. igłę i szew polipropylenowy 6-0 umieszcza się w odpowiedniej pozycji do wykonania opaski aortalnej.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Włócznie Absorpcyjne	F.S.T	Numer katalogowy 18105-03	Wchłanianie płynów podczas zabiegu
Ostrza	F.S.T	Numer katalogowy 10011-00	Aby wykonać nacięcie skóry
Buprenorfina	Ulga		Lek przeciwbólowy
wymazówka	Johnsona		Wchłanianie płynów podczas zabiegu
Krem do depilacji	Veet powiedział:		Aby usunąć zwierzę
Jednorazowy pokrowiec na stół operacyjny	MEDYCYNA	DYND4030SB	Aby pokryć obszar operacyjny
Monitor CO2 przy końcach pływów	Naukowy Kent	CapnoStat	Aby kontrolować nasycenie gazem wydechowym
Kleszcz/pęseta	F.S.T	Numer katalogowy 11255-20	Do preparowania tkanek i aorty
Kleszcz/pęseta	F.S.T	Numer katalogowy: 11272-30	Do preparowania tkanek i aorty
Kleszcz/pęseta	F.S.T	Numer katalogowy: 11151-10	Do preparowania tkanek i aorty
Kleszcz/pęseta	F.S.T	Zobacz materiał 11152-10	Do preparowania tkanek i aorty
Instalacja gazowa	Penlon Sigma Delta		Do znieczulenia i wentylacji mechanicznej
Hemostatyki	F.S.T	Numer katalogowy 13010-12	Aby przytrzymać szew przed aortą
Hemostatyki	F.S.T	Numer katalogowy 13011-13	Aby przytrzymać szew przed aortą
Pomoce do podwiązywania	F.S.T	Numer katalogowy 18062-12	Aby założyć szew wokół aorty
Zwijacz magnetyczny	F.S.T	Numer katalogowy 18200-20	Aby pomóc utrzymać zwierzę we właściwej pozycji
Uchwyt na igłę	F.S.T	Numer katalogowy 12503-15	Aby zszyć zwierzę
Igła 26 g	B-BRAUN	4665457	Służy jako forma o średnicy zwężenia aorty
tlen	Air Liquide		Do znieczulenia i wentylacji mechanicznej
Szew polipropylenowy	Vycril	W8304/W8597	Aby zszyć zwierzę i wykonać zwężenie
Roztwór jodu powidonu	Betadine (Betadyna)®		Środek antyseptyczny do skóry
Laboratorium PowerLab	Instrumenty Millar	ML880 PowerLab 16/30	Pozyskiwanie sygnału pętli fotowoltaicznej
Pulsoksymetr Kent Scientific	MouseStat (Statystyka Ruchu		Aby kontrolować tętno i saturację krwi
Zwijacza	F.S.T	Numer katalogowy 17000-01	Aby zapewnić lepszy przegląd aorty
Rękojeść skalpetu	F.S.T	Numer katalogowy 10003-12	Aby wykonać nacięcie skóry
nożyczki	F.S.T	Numer katalogowy: 15070-08	Aby przeciąć szew w operacji odpaskowywania
nożyczki	F.S.T	Numer katalogowy 14084-09	Do cięcia innego materiału podczas zabiegu np. szwu, papki
Sewofluran	Baxter	533-CA2L9117
Moduł kontroli temperatury	Naukowy Kent	Właściwa temperatura	Do kontrolowania temperatury ciała zwierząt
Respirator	Naukowy Kent	Pakiet PhysioSuite	Aby przewietrzyć zwierzę
Łaźnia wodna	Thermo Scientific™	Zobacz materiał TSGP02	Aby utrzymać temperaturę wody odpowiednią do podgrzania kategorii pętli P-V