Prenatalne pobieranie zarodków myszy: procedura pobierania zarodków od ciężarnej myszy

Streszczenie

Źródło: Yun, K. Ocena wad niedrożności połączenia dróg moczowych za pomocą iniekcji barwnika błękitu metylenowego. J. Vis. Exp.(2017)

Ten film pokazuje pobieranie zarodków od ciężarnej myszy. Odzyskane zarodki okołoporodowe mogą być wykorzystane jako systemy modelowe do badania rozwoju ssaków.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Presekcja embrionów prenatalnych

1. Wyczyść nożyczki preparacyjne i kleszcze 70% etanolem.
2. Aby pobrać zarodki okołoporodowe w E18.5 lub E19.5, należy najpierw poddać eutanazji ciężarne myszy za pomocą inhalacji CO₂ , a następnie przeprowadzić zwichnięcie szyjki macicy zgodnie z wytycznymi etycznymi.
   nuta: Ciężarna samica myszy zwykle rodzi od E18,5, jednak większe nerki są łatwiejsze do manipulowania. W związku z tym nerki w wieku E19,5 bliżej urodzenia są łatwiejsze do przeprowadzenia tej analizy. Jednak szczenięta z obustronną niedrożnością dróg moczowych umierają po urodzeniu. W zależności od charakterystyki myszy doświadczalnych, odpowiedni dzień/godzina zbierania powinna być empirycznie określona.
3. Rozpyl 70% etanolu na brzuszną powierzchnię brzucha, a następnie otwórz jamę brzuszną brzusznie za pomocą nożyczek preparacyjnych i kleszczy.
4. Podnieś całą macicę i oddziel ją od ciała, przecinając nożyczkami preparacyjnymi na końcach rogów macicy.
5. Przepłucz całą macicę 1x PBS na szalce Petriego.
6. Przeciąć macicę segmentowo nożyczkami preparacyjnymi i usunąć decyduę łożyskową za pomocą kleszczy preparacyjnych, aby odsłonić zarodki w woreczkach żółtkowych.
7. Najpierw usuń woreczek żółtkowy, a następnie usuń błonę owodniową za pomocą kleszczy preparacyjnych, aby uwolnić zarodki okołoporodowe.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Delikatne nożyczki operacyjne	Narzędzie chirurgiczne Roboz Co.	Złącze RS-6702
Mikro kleszcze preparacyjne	Narzędzie chirurgiczne Roboz Co.	Złącze RS-5135
Pęseta Dumont; Wzór #5	Narzędzie chirurgiczne Roboz Co.	Złącze RS-5045
Quality Biological Inc. SÓL FIZJOLOGICZNA NORMALNA - 500ML	Rybak naukowy	tel. 50-983-204