$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.
1. Przygotowanie zwierzęcia
- Środek przeciwbólowy należy wstrzyknąć 30 minut przed zabiegiem (4 mg/kg karprofenu i 0,1 mg/kg buprenorfiny).
- Zapisać masę ciała myszy, aby dostosować dawkę Rose Bengal do wstrzyknięcia (10 μl/g, tj. 100 μg/g).
- Umieść mysz w komorze indukcyjnej o natężeniu przepływu izofluranu 4%, aby znieczulić ją do momentu ustania spontanicznego ruchu ciała i wibrysów.
- Przenieś mysz do ramki stereotaktycznej i umieść ją w pozycji leżącej z nosem w masce anestezjologicznej. Utrwalić zwierzę i utrzymywać stężenie izofluranu na poziomie 4% przez 1 minutę. Następnie należy zmniejszyć i utrzymać stężenie izofluranu na poziomie 2%.
- Delikatnie włóż sondę doodbytniczą, aby monitorować temperaturę podczas zabiegów chirurgicznych. Ustaw powiązaną poduszkę grzewczą sterowaną sprzężeniem zwrotnym, aby utrzymać temperaturę korpusu myszy na poziomie 37 °C.
- Nałóż maść do oczu z dekspantenolem na oba oczy i oczyść skórę i otaczającą sierść środkiem dezynfekującym.
2. Model fotozakrzepicy
- Wykonaj podłużne nacięcie o długości 2,0-2,5 cm i cofnij się, aby odsłonić czaszkę. Wykonaj odsłonięcie czaszki za pomocą jednego cięcia, aby uniknąć powikłań rany.
- Delikatnie usuń okostną bawełną i zidentyfikuj szwy koronalne.
- Załóż okulary ochronne, włącz laser 561 nm i zaznacz bregmę +3 mm po lewej stronie.
- Wyłącz laser, naklej naklejkę z otworem o średnicy 4 mm umieszczoną w oznaczonych wyżej współrzędnych.
- Wstrzyknąć myszy różę bengalską (10 μl/g) dootrzewnowo. Umieść wiązkę lasera w odległości 4-5 cm od czaszki, włącz laser 561 nm i oświetlaj czaszkę przez 20 minut.
- Nałóż dwie krople 0,9% soli fizjologicznej na czaszkę, aby się nawodnić, zszyj ranę i umieść zwierzę w komorze regeneracyjnej w temperaturze 37 °C, aby wyzdrowiało ze znieczulenia. Po 1 godzinie umieść myszy z powrotem w klatkach w pomieszczeniu o kontrolowanej temperaturze.
- Analgezję należy wstrzykiwać co 12 godzin przez 3 dni po zabiegu (4 mg/kg karprofenu i 0,1 mg/kg buprenorfiny).