Nienaruszone jajniki pobrane od myszy: zabieg chirurgiczny mający na celu wyizolowanie całego jajnika z modelu mysiego

Streszczenie

Źródło: Mason, J. B. et al. Ortotopowe procedury przeszczepu jajników w celu zbadania wpływu starzenia się jajników na długość życia i zdrowia u samic myszy. J. Vis. Exp. (2018)

W tym filmie opisujemy zabieg chirurgiczny polegający na pobraniu nienaruszonego jajnika z modelu mysiego.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Przeszczepienie nienaruszonych jajników starszym myszom

UWAGA: Ten protokół opisuje procedurę stosowaną podczas transferu jajników od młodej myszy (60 dni życia) do postreprodukcyjnej samicy (12 miesięcy) tego samego szczepu wsobnego. Ta sama procedura jest stosowana do przeszczepu jajników między dowolnymi dwiema samicami myszy.

1. Zważyć i znieczulić zwierzę dawcy przez wstrzyknięcie dootrzewnowe (I.P., igła 27 ga), na przykład przy użyciu koktajlu ketaminy, ksylazyny i acepromazyny (65 mg/kg ketaminy, 13 mg/kg ksylazyny 2,0 mg/kg, acepromazyna; dawka koktajlowa - 6,5 ml/kg). Umieść zwierzę z powrotem w ogrzewanej klatce domowej, aż znieczulenie zacznie działać.
2. Po znieczuleniu wyjmij zwierzę z domowej klatki i połóż je na rozgrzanych ręcznikach papierowych. Za pomocą maszynki do strzyżenia (preferowane ostrze #40) usuń włosy kilka mm od linii bocznej do środkowej z każdej strony, zaczynając tuż pod żebrami i przesuwając się dystalnie, przygotowując przyciętą "łatkę" o boku około 2-3 cm kwadratowych po obu stronach leżącej myszy, pozostawiając pasek włosów około 1-2 cm zakrywający linię środkową.
3. Delikatnie przetrzyj przycięte miejsca 70% etanolem i nałóż roztwór betadyny na przycięte miejsce za pomocą wacika z bawełnianą końcówką.
4. Nałożyć żel z antybiotykiem w celu ochrony oczu i podać meloksykam (2,0 mg/kg) podskórnie (S.C., igła 27 ga) na boczną stronę szyi zwierzęcia w celu złagodzenia bólu pooperacyjnego.
5. Umieść zwierzę w pozycji leżącej na rozgrzanym, sterylnym polu operacyjnym i przetrzyj przycięty obszar bawełnianą gazą o wymiarach 2 cm x 2 cm nasączoną etanolem o sile 70%.
6. Wykonaj nacięcie przylędźwiowe o długości 1,0-1,5 cm i tępo wypreparuj skórę z leżącej poniżej powięzi. Wykonaj kolejne nacięcie przez powięź. Tępo rozciąć bocznie pod tą powięzią tak powierzchownie, jak to możliwe, aż dotrze do jamy brzusznej
7. Umieść małą serwetkę chirurgiczną na nacięciu (wyciętą z gazy o wymiarach 2 cm x 2 cm) i zwilż serwetkę sterylnym roztworem soli fizjologicznej.
8. Za pomocą małych kleszczy zlokalizuj tkankę tłuszczową otaczającą jajnik w jamie brzusznej i delikatnie usuń poduszeczkę tłuszczową i jajnik i umieść je na zwilżonej serwiturze z gazy. Poduszka tłuszczowa jajnika będzie wydawała się "bielsza" niż otaczająca ją tkanka tłuszczowa.
9. Umieść 1,5-calowy zacisk Bulldog na poduszce tłuszczowej (uważając, aby nie zasłaniać kaletki jajnika), aby utrzymać przewód na miejscu podczas zabiegu.
10. Przesuń mikroskop preparacyjny na miejsce i wyraźnie zidentyfikuj kaletkę jajnika. Chwyć kaletkę za pomocą dwóch kleszczy zegarmistrzowskich i naciąć kaletkę jajnika naprzeciwko wnęki jajnika, aby odsłonić jajnik. Jeśli zamierzony obszar dostępu kaletki jest silnie unaczyniony, nałóż kroplę epinefryny (1:100 000) za pomocą strzykawki na powierzchnię kaletki, aby zmniejszyć krwawienie w momencie rozdarcia.
11. Delikatnie usuń jajnik z kaletki jajnika i wytnij jajnik, zaciskając wnękę jajnika kleszczami zegarmistrzowskimi, aby zapobiec krwawieniu.
12. Umieść jajnik dawczyni w szkiełku zegarkowym wypełnionym sterylnym roztworem soli fizjologicznej o temperaturze 4°C, luźno przykryj i odstaw na bok, aż będzie gotowy do przeszczepu.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Mikroskop preparacyjny	Dowolna luneta sekcyjna z regulowaną odległością roboczą.
Recyrkulator ciepłej wody i odpowiednia podkładka do Twojego rozmiaru pola chirurgicznego / rekonwalescencji.	Stryker/Gaymar	Zobacz materiał TP700	Krążące poduszki wodne wytwarzają równomierne i stałe pola robocze i regeneracyjne o stałej temperaturze.
Narzędzia chirurgiczne - narzędzia preparacyjne do dostępu do dróg rodnych			Wybór konkretnych narzędzi chirurgicznych jest wysoce specyficzny dla chirurga
Materiał szwu do kaletki jajnika	Szwy	2809G: 9-0 lub 2810G: 10-0 STOŻEK ETHILON 5" BV130-5	Szew 10-0 może być trudny do zlokalizowania, jeśli zostanie upuszczony na pole operacyjne.
Wchłanialna gąbka żelatynowa	Pfizer	Pianka żelowa - PFIZER 09-0315-08	Pokroić na małe (~2mm) kawałki w sterylnych warunkach.
Zszywki do zamykania skóry	Becton Dickinson	MikRon Autoclip 9mm (BD 427631)
Maść do oczu.	MWI Zaopatrzenie Weterynaryjne Co.		Puralube sterylna maść okulistyczna
Strzykawki do znieczulenia, analgezji i epinefryny	MWI Zaopatrzenie Weterynaryjne Co	BD 305536	27g x 3/8in, faza śródskórna 1/2ml
Strzykawki do soli fizjologicznej.	MWI Zaopatrzenie Weterynaryjne Co	BD 309657.	Strzykawka 3 ml, końcówka Luer-lok, igła 27 g
Maszynki do strzyżenia/ostrze	Andis powiedział:	Akumulatorowa maszynka do strzyżenia Super AGR+ ™ i ostrze CeramicEdge® #40.	Dowolne maszynki do strzyżenia z cienkim ostrzem.
etanol	Uniwersyteckie zaopatrzenie w chemikalia		Rozcieńczyć do 70% do użycia.
Roztwór betadyny	MWI Zaopatrzenie Weterynaryjne Co.	3233
Gaziki 2x2	MWI Zaopatrzenie Weterynaryjne Co.	Numer katalogowy: 3073	Autoklawowanie z pakietami chirurgicznymi
Koraliki ze szkła borokrzemianowego	Sigma-Aldrich Co	Z273619	Autoklaw w fiolkach do intylacji
Ditlenek 4-winylocykloheksenu	Sigma-Aldrich Co.	Numer katalogowy: 94956

elektroniczne powiedział: SZT.