$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.
1. Operacja i założenie pierścienia czaszkowego
UWAGA: Pełne wsparcie dla instalacji myszy składa się z 4 elementów, bloku i płytki, pierścienia do przytrzymywania główki myszy oraz do mocowania pierścienia do bloku (Rysunek 1A). Wszystkie elementy podpory zostały pozyskane z i.materialise.com metodą druku 3D. Płyta wykonana jest z polimeru akrylonitryl-butadien-styren (ABS), blok i śruba ze stali nierdzewnej, a pierścień z wysokiej jakości stali nierdzewnej (wysokoszczegółowej stali nierdzewnej) (patrz rysunek 2, aby zapoznać się z wymiarami i materiałami do drukowania plików 3D). Blok mocowany jest na stałe do wspornika, przykręcany lub klejony. Po zamocowaniu pierścienia na czaszce myszy należy go przykręcić do uchwytu bloku (Rysunek 1A).
- Zwilż włosy na skórze głowy ręcznikiem papierowym zwilżonym 70% etanolem do dezynfekcji. Usuń wszystkie luźne włosy mokrym ręcznikiem papierowym.
nuta: Dla wygody skórę głowy można ogolić przed zabiegiem.
- Naciąć skórę głowy, formując literę T w linii środkowej do 1 cm i między uszami, aby odsłonić kalwarię, używając sterylnych cienkich nożyczek i pęsety.
nuta: Pierścień zostanie umieszczony tak, aby zachodził na kość czołową i ciemieniową (ryc. 1B).
- Użyj sterylnej pęsety, aby odsłonić czaszkę. Ostrożnie usuń okostną nożyczkami i pęsetą. Użyj sterylnego bawełnianego wacika nasączonego solą fizjologiczną, aby usunąć całą okostną i wszelkie zanieczyszczenia lub włosy, które mogą zmienić obrazowanie.
nuta: Aby ograniczyć reakcje zapalne, należy bardzo uważać, aby nie uszkodzić kości.
- Usuń wszelkie ślady krwi, spłukując solą fizjologiczną i szybko osusz kość suchym bawełnianym wacikiem. Nałóż klej w żelu na pierścień, umieść go na odsłoniętej kości i utrzymuj przez kilka sekund, aby pierścień był mocno przymocowany do czaszki.
nuta: Klej nie może dostać się do pola obserwacji, ponieważ może to prowadzić do niepożądanej autofluorescencji.
- Lekko zwilż czaszkę bawełnianym wacikiem zanurzonym w soli fizjologicznej.
- Przygotuj silikonową pastę dentystyczną, dokładnie mieszając niebieskie i żółte składniki w stosunku 1:1. Nałóż pastę dentystyczną na całym pierścieniu, aby uszczelnić, aby zapobiec wyciekom podczas obrazowania. Ostrożnie usuń pastę dentystyczną lub klej, które mogły dostać się do pierścienia.
- Napełnij pierścień solą fizjologiczną i sprawdź, czy nie ma wycieków.
nuta: Sól fizjologiczna służy jako medium zanurzeniowe dla obiektywu mikroskopu. Krwawienie może być bardziej krytyczne w przypadku myszy z wadami związanymi z hemostazą. Istotne jest, aby zapobiec przedostawaniu się krwi do pierścienia, ponieważ może to spowodować rozmycie dalszego obrazowania.
- Umieść mysz na wsporniku i przykręć pierścień do uchwytu bloku (Rysunek 1C). Pod głową zwierzęcia należy umieścić złożone kompresy, aby podnieść głowę i zapobiec oderwaniu się pierścienia od czaszki.
nuta: Głowa jest bezpośrednio zamocowana, dzięki czemu zapobiega ruchom obrazu spowodowanym oddychaniem.
- Umieść wspornik i zespół myszy w podgrzewanej komorze mikroskopu (Rysunek 1D).
UWAGA: Należy uważać, aby w żadnym momencie nie usunąć wprowadzonego cewnika.
