Ekstrakcja miseczki siatkówki od myszy: procedura chirurgiczna mająca na celu uzyskanie nienaruszonej miseczki siatkówki z oka myszy

Streszczenie

Źródło: Jiang, K. et al. Oznaczanie oddychania mitochondrialnego i glikolizy w próbkach tkanki siatkówki ex vivo. J. Vis. Exp (2021)

Ten film opisuje protokół izolowania miseczki siatkówki bez zewnętrznych warstw pokrywających od gałki ocznej myszy. Wyekstrahowana tkanka siatkówki może pomóc w badaniu różnych szlaków metabolicznych zachodzących w komórkach siatkówki.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Rozwarstwienie miseczki siatkówki

1. Eutanazja myszy przez uduszenie CO₂ zgodnie z wytycznymi instytucjonalnymi dotyczącymi eutanazji.
   nuta: Nie pozostawiaj zwierzęcia w komorze CO₂ dłużej niż czas potrzebny do eutanazji.
2. Wyłuszczyć oczy i umieścić w lodowatym buforze 1x PBS na szalce Petriego, a następnie umieścić go pod mikroskopem preparacyjnym.
3. Ostrożnie usuń, przecinając mikronożyczkami, dodatkowe mięśnie proste przyczepione na zewnątrz gałki ocznej i odetnij nerw wzrokowy.
4. Użyj igły 30 G, aby przebić otwór na krawędzi rogówki (rąbka); służy on jako miejsce wprowadzenia mikronożyczek. Następnie za pomocą drobnych mikronożyczek preparacyjnych wykonaj okrągłe nacięcie wzdłuż krawędzi rogówki, oddzielając ją od tylnej muszli ocznej.
5. Użyj ostrych kleszczy preparacyjnych, aby usunąć rogówkę, soczewkę i ciało szkliste z dala od muszli ocznej.
6. Użyj drobnych mikronożyczek preparacyjnych, aby wykonać kilka małych nacięć na warstwie twardówki na krawędzi muszli ocznej. Unikaj przecinania warstwy siatkówki. Użyj dwóch ostrych kleszczy preparacyjnych, aby przytrzymać tkankę twardówki po każdej stronie nacięcia i bardzo ostrożnie pociągnij za warstwę twardówki, aby usunąć ją z siatkówki nerwowej. Powtarzaj to wokół muszli ocznej, aż cała twardówka zostanie usunięta i uzyskasz nienaruszoną miseczkę siatkówki.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
1X PBS	Rybak termiczny	Nr kat. 14190-144
Igła o rozmiarze 30	Precyzyjny ślizg BD	305106
Dziurkacz do biopsji, 1 mm	Integra Miltex	33-31AA
Komora do uduszenia CO2
Kleszcze preparacyjne-Dumont #5	Narzędzia naukowe	Numer katalogowy 11251-10	Prosta końcówka
Kleszcze preparacyjne-Dumont #7	Narzędzia naukowe	Rozdział 11274-20	Zakrzywiona końcówka
Mikroskop preparacyjny
Kleszcze Graefe	Narzędzia naukowe	Numer katalogowy: 11051-10	Zakrzywiona, ząbkowana końcówka
Mikronożyczki	Narzędzia naukowe	Numer katalogowy: 15004-08	Zakrzywiona końcówka