Pozycjonowanie laserowej sondy dopplerowskiej: technika wszczepiania sondy nad tętnicą środkową mózgu w celu pomiaru przepływu krwi w modelu mysim

Streszczenie

Źródło: Llovera, G., et al. Modeling Stroke in Mys: Transient Middle Cerebral Artery Ocluzion through External Whipery. J. Vis. Exp. (2021).

Ten film opisuje procedurę chirurgiczną polegającą na unieruchomieniu laserowej sondy dopplerowskiej nad tętnicą środkową mózgu myszy, czyli MCA. Sonda pomaga mierzyć przepływ krwi w mikrokrążeniu mózgu poprzez pomiar przesunięcia dopplerowskiego spowodowanego ruchem czerwonych krwinek w tętnicy.

Protokół

Wszystkie procedury związane z modelami zwierzęcymi zostały sprawdzone przez lokalny komitet ds. opieki nad zwierzętami oraz komisję weterynaryjną JoVE.

1. Przygotowanie i ustawienie laserowego Dopplera

1. Przygotuj uchwyt na laserową sondę dopplerowską, odcinając końcówkę końcówki pipety o pojemności 10 μl (o długości 3-5 mm).
   nuta: Wszystkie narzędzia są sterylizowane za pomocą sterylizatora do gorących kulek. Powierzchnie są również dezynfekowane przed i po zabiegu za pomocą mikrobiologicznego środka dezynfekującego w sprayu. Przed zabiegiem obszary otaczające głowę i klatkę piersiową myszy są dezynfekowane sprayem do dezynfekcji ran.
2. Wstrzyknąć środek przeciwbólowy myszy na 30 minut przed zabiegiem (4 mg/kg karprofenu i 0,1 mg/kg buprenorfiny, dootrzewnowo).
3. Znieczulić mysz, umieszczając ją w komorze indukcyjnej z natężeniem przepływu izofluranu 4%, aż do ustania spontanicznych ruchów ciała i wibrysów.
4. Umieść mysz w pozycji leżącej w obszarze operacyjnym z nosem w masce anestezjologicznej. Utrzymuj stężenie izofluranu na poziomie 4% przez kolejną minutę, a następnie zmniejsz je i utrzymuj na poziomie 2%.
5. Ustaw powiązaną poduszkę grzewczą sterowaną sprzężeniem zwrotnym, aby utrzymać temperaturę ciała myszy na poziomie 37 °C i delikatnie włóż sondę doodbytniczą, aby monitorować temperaturę podczas zabiegów chirurgicznych.
6. Nałóż maść do oczu z dekspantenolem na oba oczy.
7. Zdezynfekuj skórę i włosy wokół lewego oka i ucha 70% etanolem.
8. Przetnij skórę głowy między lewym uchem a okiem (1 cm długości), aby odsłonić kość czaszki.
9. Przetnij i wycofaj mięsień skroniowy, aby uwidocznić MCA pod czaszką.
10. Przymocuj klejem zewnętrzną część końcówki przytrzymującej laserową sondę dopplerowską/włókno na górze lewego MCA za pomocą kleju. Następnie przyklej skórę, aby zamknąć ranę wokół uchwytu końcówki. Nałóż 2-3 krople kleju utwardzającego, aby przyspieszyć proces. Upewnij się, że laserowe włókno dopplerowskie nie jest przyklejone i można je łatwo wyjąć z uchwytu końcówki w dowolnym momencie.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Rampa 45°	BHP Kunststofftechnik		wysokość: 18 cm
Strzykawka 5 ml	Braun
System znieczulenia izofluranem	Dräger
Pomada Bepanthen	Bayer
Myszy C57Bl/6J	Rzeka Karola	000664
Etanol 70%	CLN Chemikalien Laborbedorf	521005
Etanol 96%	CLN Chemikalien Laborbedorf	522078
Etanol 99%	CLN Chemikalien Laborbedorf	ETO-5000-99-1
Włókna	Doccol	Numer katalogowy: 602112PK5Re
Cienkie kleszcze kątowe 45	Certyfikat FST	Numer katalogowy: 11251-35
Cienkie kleszcze	Certyfikat FST	Rozdział 11252-23
Cienkie nożyczki	Certyfikat FST	Numer katalogowy: 14094-11
klej	Orechseln	Zobacz materiał BSI-112
Utwardzacz Klej	Drechseln & Mehr	Zobacz materiał BSI-151
Koc grzewczy	Regulator temperatury FHC DC
Izofluran	opat	Zobacz materiał B506
Doppler laserowy	Perimed	PF 5010 - LDPM - System peryfluxowy 5000
Laserowa sonda dopplerowska	Perimed	91-00123

powiedział: szt.