$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Wszystkie procedury związane z modelami zwierzęcymi zostały sprawdzone przez lokalny komitet ds. opieki nad zwierzętami oraz komisję weterynaryjną JoVE.
1. Przygotowanie materiału i instrumentów
- Podłącz koc grzewczy, aby utrzymać temperaturę obszaru operacyjnego i temperaturę ciała myszy podczas znieczulenia w temperaturze 37 °C.
- Używaj nożyczek i kleszczyków w autoklawie, przygotuj 70% roztwór etanolu i przygotuj do użycia maść do oczu z dekspantenolu, kilka kawałków bawełny i pleciony szew poliestrowy powlekany 5-0. Przygotuj strzykawkę o pojemności 1 ml z 0,9% roztworem soli fizjologicznej (bez igły), aby utrzymać nawodnienie miejsca nacięcia zwierzęcia. Przygotuj gaz znieczulający (100%O2 + izofluran).
- Przygotuj uchwyt na laserową sondę dopplerowską, odcinając końcówkę końcówki pipety o pojemności 10 μl (długość 3-5 mm).|
UWAGA: Wszystkie narzędzia są sterylizowane za pomocą gorącego sterylizatora kulkowego. Powierzchnie są również dezynfekowane przed i po zabiegu za pomocą mikrobiologicznego środka dezynfekującego w sprayu. Przed zabiegiem obszary otaczające głowę i klatkę piersiową myszy są dezynfekowane sprayem do dezynfekcji ran.
2. Przygotowanie laserowego Dopplera
- Wstrzyknąć środek przeciwbólowy myszy na 30 minut przed zabiegiem (4 mg/kg karprofenu i 0,1 mg/kg buprenorfiny, dootrzewnowo).
- Znieczulić mysz, umieszczając ją w komorze indukcyjnej z natężeniem przepływu izofluranu 4%, aż do ustania spontanicznych ruchów ciała i wibrysów.
- Umieść mysz w pozycji leżącej w obszarze operacyjnym z nosem w masce anestezjologicznej. Utrzymuj stężenie izofluranu na poziomie 4% przez kolejną minutę, a następnie zmniejsz je i utrzymuj na poziomie 2%.
- Ustaw powiązaną poduszkę grzewczą sterowaną sprzężeniem zwrotnym, aby utrzymać temperaturę ciała myszy na poziomie 37 °C i delikatnie włóż sondę doodbytniczą, aby monitorować temperaturę podczas zabiegów chirurgicznych.
- Nałóż maść do oczu z dekspantenolem na oba oczy.
- Zdezynfekuj skórę i włosy wokół lewego oka i ucha 70% etanolem.
- Przetnij skórę głowy między lewym uchem a okiem (1 cm długości), aby odsłonić kość czaszki.
- Przetnij i wycofaj mięsień skroniowy, aby uwidocznić MCA pod czaszką.
- Przymocuj klejem zewnętrzną część końcówki przytrzymującej laserową sondę dopplerowską/włókno na górze lewego MCA za pomocą kleju. Następnie przyklej skórę, aby zamknąć ranę wokół uchwytu końcówki. Nałóż 2-3 krople kleju utwardzającego, aby przyspieszyć proces. Upewnij się, że laserowe włókno dopplerowskie nie jest przyklejone i można je łatwo wyjąć z uchwytu końcówki w dowolnym momencie.
3.Przejściowy model MCAo (okluzja)
- Obróć mysz do pozycji leżącej. Włóż pysk do stożka anestezjologicznego i przymocuj łapy taśmą.
- Zdezynfekuj skórę i włosy otaczające klatkę piersiową i wykonaj 2-centymetrowe nacięcie w linii środkowej szyi.
- Użyj kleszczy, aby rozsunąć skórę i gruczoły podżuchwowe. Użyj retraktorów, aby przytrzymać mięsień mostkowo-sutkowy, odsłonić pole operacyjne i znaleźć lewą tętnicę szyjną wspólną (CCA). Wypreparować CCA z tkanki łącznej i otaczających nerwów (bez uszkadzania nerwu błędnego) i wykonać przejściowe podwiązanie przed rozwidleniem.
- Rozciąć tętnicę szyjną zewnętrzną (ECA) i zawiązać stały węzeł w najbardziej dystalnej widocznej części. Umieść kolejny szew pod ECA, w pobliżu rozwidlenia i przygotuj luźny węzeł do późniejszego zastosowania.
- Wypreparuj tętnicę szyjną wewnętrzną (ICA) i umieść na niej klips mikronaczyniowy, 5 mm nad rozwidleniem. Upewnij się, że nie uszkodzisz nerwu błędnego.
- Wyciąć mały otwór w ECA między ciasnymi i luźnymi podwiązaniami; należy uważać, aby nie przeciąć całego ECA.
- Wprowadź filament i przesuń go w kierunku CCA. Dokręć luźne podwiązanie w ECA wokół światła, aby na krótko zabezpieczyć włókno w tej pozycji i uniknąć krwawienia podczas wyjmowania klipsa mikronaczyniowego.
- Zdejmij klips mikronaczyniowy i włóż filament przez ICA, aż do osiągnięcia początku MCA poprzez wykrycie gwałtownego zmniejszenia (>80%) przepływu krwi w mózgu, mierzonego za pomocą laserowego Dopplera. Zamocuj filament w tej pozycji, dalej zaciskając węzeł wokół ECA.
nuta: Gdy filament porusza się w odpowiednim kierunku, przesuwa się płynnie i nie należy zaobserwować żadnego oporu.
- Rejestruj wartości laserowego Dopplera przed i po włożeniu filamentu.
- Usuń retraktor i przenieś mięsień mostkowo-sutkowy i gruczoły podżuchwowe przed zszyciem rany. Wyjąć laserową sondę dopplerowską i umieścić zwierzę w komorze rekonwalescencji w temperaturze 37 °C na 1 godzinę (do czasu usunięcia filamentu).