$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.
1. Kolonoskopia i indukcja ran
- Wstępnie zmontuj elementy endoskopu, wkładając najpierw endoskop ze sztywnym otworem 1,9 mm do osłony (rysunek 1A-B). Podłącz pompę powietrza (aby zapewnić wdmuchiwanie okrężnicy) za pomocą dostarczonej rurki do zaworu gazowego po lewej stronie osłony obok kanału roboczego (Rysunek 1C).
nuta: Chociaż opisana tutaj soczewka ma wartość 0°, do tego celu można również użyć soczewki 30°.
- Upewnij się, że kanał roboczy jest w pozycji otwartej i włóż 3 kleszczyki do biopsji Fr przez kanał roboczy i przesuń go do końca osłonki (upewniając się, że nie wystaje z osłony) (Rysunek 1C). Przymocuj zmontowany endoskop do źródła światła i urządzenia do obrazowania wideo zgodnie z instrukcjami producenta.
- Znieczulić mysz 5% izofluranem z tlenem w komorze indukcyjnej. Następnie przenieś mysz na endoskopową platformę inscenizacyjną zawierającą system grzewczy (zapobiegający hipotermii) po jej brzusznej stronie i utrzymuj w znieczuleniu za pomocą stożka nosowego z 2% izofluranem z tlenem. Dodaj maść weterynaryjną do oczu, aby zapobiec wysuszeniu podczas znieczulenia. Upewnij się, że mysz jest w pełni znieczulona, delikatnie ściskając tylną stopę, aby sprawdzić odruch.
nuta: Techniką tę można wykorzystać dowolny szczep lub dowolną płeć myszy; Jednak zaleca się, aby myszy miały co najmniej 8 tygodni, aby były wystarczająco duże do zabiegu.
- Dodaj maść weterynaryjną do oczu, aby zapobiec wysuszeniu podczas znieczulenia.
- Upewnij się, że mysz jest w pełni znieczulona, delikatnie ściskając tylną stopę, aby sprawdzić, czy nie ma odruchu.
- Napełnij strzykawkę o pojemności 3 ml dołączoną igłębką do szczurów solą fizjologiczną buforowaną fosforanami (PBS) o temperaturze pokojowej. Włóż igłę na około 1 cm do odbytu myszy i delikatnie wstrzyj PBS, aby usunąć kał. Kilka granulek kału powinno opuścić mysz wraz z PBS, który został podany w infuzji.
nuta: Wkroplenie nadmiernej objętości PBS może spowodować tworzenie się piany w świetle, która może zasłaniać widoczność światła.
- Włóż zmontowany endoskop 0,5 cm do odbytu myszy. Wsuń kleszcze do biopsji do światła odbytnicy, aż pełne "szczęki" (w tym zawiasy) kleszczy znajdą się poza końcem pochewki (jak zaobserwowano na monitorze wideo). Obróć kleszcze o 90°, aby szczęki otworzyły się w orientacji wschód-zachód.
- Aby wykonać biopsję, otwórz kleszcze i przesuń się o około 1 cm, zamknij kleszcze i jednym płynnym ruchem szybko pociągnij kleszcze, pozostawiając je zamknięte.
- Unikaj całkowitego wdmuchiwania jelita grubego podczas wykonywania biopsji. Dlatego na tym etapie pozostaw otwartą prawą stronę zaworu gazowego; Chociaż należy zauważyć, że po otwarciu kleszczy istnieje ryzyko uszkodzenia błony śluzowej, gdy okrężnica znajduje się w tej pozycji.
