Method Article

Model pętli jelita krętego myszy: model chirurgiczny do badania przepuszczalności jelit u myszy

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Źródło: Boerner, K., et al. Funkcjonalna ocena przepuszczalności jelit i migracji przeznabłonkowej neutrofili u myszy przy użyciu standaryzowanego modelu pętli jelitowej. J. Vis. Exp. (2021)

Ten film demonstruje generowanie modelu pętli jelita krętego do badania przepuszczalności jelit w modelu mysim. Metoda ta zapewnia żywy model do zrozumienia funkcji bariery nabłonkowej i wynikającej z niej odpowiedzi immunologicznej.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Generowanie pętli jelita krętego

  1. Przygotowanie skóry: Wyszoruj sierść linii środkowej brzucha wacikami nasączonymi alkoholem lub gąbką z gazy nasączoną 70% etanolem. Nie zwilżaj dużego obszaru futra alkoholem, aby zapobiec hipotermii.
  2. Za pomocą nożyczek wykonaj laparotomię w linii środkowej. Wykonaj pionowe nacięcie na środku brzucha (około 2 cm długości) i odsłoń otrzewną. Uważaj, aby nie uszkodzić narządów wewnątrz jamy brzusznej.
  3. Umieść wstępnie przyciętą mokrą bawełnianą gazę na odsłoniętej jamie brzusznej.
  4. Użyj mokrych bawełnianych wacików, aby zmobilizować i uwidocznić kątnicę. Ostrożnie umieść kątnicę na mokrej bawełnianej gazie.
    nuta: Kątnica jest zlokalizowana w lewym kwadrancie ogonowym jamy brzusznej u większości myszy, niezależnie od płci zwierzęcia.
  5. Użyj mokrych bawełnianych wacików, aby zmobilizować i delikatnie zewnętrzizować jelito kręte, którego odcinek końcowy (dystalny koniec) jest przymocowany do kątnicy (ryc. 1B).
  6. Rozłóż co najmniej 6 cm końcowego odcinka jelita krętego na mokrej gazie bawełnianej bez przerywania naczyń krezkowych i dopływu krwi. Dopływ krwi jest utrzymany, jeśli nie ma krwawienia, a tkanka zachowuje swój różowy kolor (ryc. 1B).
    nuta: Unikaj wysuszania odsłoniętych tkanek, utrzymując tkanki wilgotne przez cały czas ciepłym HBSS (co 2 - 3 min) za pomocą strzykawki o pojemności 10 ml podłączonej do żółtej rurki do karmienia.
  7. W pobliżu kątnicy zidentyfikuj główną tętnicę w krezce, dostarczającą krew do jelita krętego. Następnie zlokalizuj dwa miejsca podwiązania w krezce, które są wolne od krytycznych naczyń krwionośnych.
  8. Za pomocą kleszczyków tkankowych mocno chwyć końcowe jelito kręte (najbliżej kątnicy) i za pomocą kleszczyków z cienką końcówką fenestruj krezkę, unikając naczyń krwionośnych. Umieść jedwabny szew w poprzek perforacji i zawiąż węzeł chirurgiczny, aby utworzyć pierwsze podwiązanie (dystalny koniec pętli).
  9. Za pomocą linijki zmierz odległość 4 cm od pierwszej ligatury i utwórz drugą ligaturę (bliższy koniec pętli), jak wspomniano w kroku 2.8 (Rysunek 1C).
  10. Cienkimi nożyczkami ostrożnie przyciąć obok każdego podwiązania, aby odizolować 4-centymetrową pętlę jelita krętego, zachowując nienaruszone ukrwienie i błonę krezkową.
    nuta: Odetnij oba końce zewnętrznego segmentu iLoop, a następnie delikatnie przepłucz jako niezbędny krok, który zapobiega interferencji zawartości światła (kału), ułatwiając w ten sposób równomierne rozproszenie FITC-dekstranu lub bodźców chemotaktycznych na całej długości izolowanego segmentu, a także umożliwiając dokładniejsze określenie ilościowe leukocytów za pomocą cytometrii przepływowej. Procedura ta pozwala również na równomierne rozdęcie błony śluzowej po wstrzyknięciu określonych objętości odczynnika i lepszą odtwarzalność między zwierzętami.
  11. Delikatnie przepłukać zawartość segmentu pętli jelita krętego ciepłym HBSS za pomocą elastycznej żółtej rurki do karmienia dołączonej do strzykawki o pojemności 10 ml.
  12. Podwiązać dwa odcięte końce zaczerwienionej pętli jelita krętego za pomocą jedwabnego szwu.
  13. Za pomocą strzykawki o pojemności 1 ml z igłą 30 G powoli wstrzyknąć 250 μl odczynnika, takiego jak dekstran FITC lub chemokina, do światła jelita. Pętla jelita krętego napełni się, powodując umiarkowane rozdęcie błony śluzowej (ryc. 1D).
    nuta: Wstrzyknąć odczynnik do światła pętli po przeciwnej stronie tętnicy krezkowej. Należy uważać, aby nie wyciągnąć pętli jelita krętego ze zwierzęcia podczas wstrzykiwania, aby uniknąć rozerwania naczyń krwionośnych i wywołania krwawienia.
  14. Za pomocą mokrych bawełnianych wacików delikatnie załóż pętlę jelita krętego, proksymalną część jelita krętego i kątnicę.
  15. Użyj uchwytu na igłę, anatomicznych kleszczyków i niewchłanialnych jedwabnych szwów 3,0 z igłą do odwrotnego cięcia, aby zamknąć ścianę brzucha.
  16. Umieść zwierzę w komorze anestezjologicznej o regulowanej temperaturze na okres inkubacji.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
Rysunek 1: Model pętli jelita krętego. (A) Schematyczny przegląd modelu pętli jelita krętego. Laparotomia środkowa jest wykonywana na myszach w znieczuleniu i umieszczana na tablicy chirurgicznej z kontrolowaną temperaturą. (B) Eksterioryzacja kątnicy (*), jelita krętego i krezki. Zidentyfikowano dwa odpowiednie miejsca do podwiązania (1,2). (C) Wyizolować odcinek o długości 4 cm: pierwszą ligaturę ...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Nie stwierdzono konfliktu interesów.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Sprzęt i materiały
Waciki nasączone alkoholem BDBd326895
Igła BD PrecisionGlide, 25G x 5/8"Bd305122
Igła BD PrecisionGlide, 30G x 1/2"Bd305106
BD 1ml Strzykawka tuberkulinowa bez igłyBd309659
15 ml probówka wirówkowaCorning14-959-53A
Corning 96-dołkowa solidna płytka polistyrenowaFisherScientific07-200-592
Naczynie hodowlane Corning bez obróbki, 10 cmMiliporeSigmaCLS430588
Aplikator z bawełnianą końcówką (wacik), 6", sterylnyFisherScientific25806 2WC
Gąbki z gazy Dynarex wypełnione bawełną, niesterylne, 2 "x 2"Targi Medex3249-1
Parownik anestezjologiczny EZ-7000 (system klasyczny, w tym jednostki grzewcze)Systemy E-ZEZ-7000
Cienkie nożyczki MoriaCertyfikat FSTNumer katalogowy 14370-22
Puralube Maść weterynaryjna, sterylny lubrykant do oczuDechra (Głuch)12920060
Kleszcze pierścieniowe (kleszcze do tkanek)Certyfikat FSTNumer katalogowy: 11103-09
Roboz Surgical 4-0 Jedwabny pleciony, 100 YDFisherScientificNC9452680
Kleszcze Semken (kleszcze anatomiczne)Certyfikat FSTRozdział 1108-13
Sofsilk Niewchłanialny powlekany szew pleciony jedwab Rozmiar 3-0, 18 ", igła 19mm długość 3/8 koło odwrotne cięcie Henryk ScheinZobacz materiał SS694
Kleszcze studenckie cienkie, kątoweCertyfikat FSTNumer katalogowy 91110-10
Strzykawka 10ml PP/PE bez igłyMillipore Sigma Z248029
Żółte rurki do karmienia gryzoni 20G x 30 mmInstechFTP-20-30 (protokół FTP-20-30
Roztwory i
Zrównoważony roztwór soli HanksaCorning21-023-CV
Sól fizjologiczna buforowana fosforanami bez wapnia i magnezuCorning21-040-CV
IzofluranHalowęglowodórNumer katalogowy: 12164-002-25
)

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Ileal Loop ModelIntestinal PermeabilityMouse ModelSurgical ProcedureMesenteric LigationChemokine InjectionFITC dextran AssayAbdominal IncisionTissue ExteriorizationLoop Flushing

Related Articles