Artykuł metodologiczny

Model pętli jelita krętego myszy: model chirurgiczny do badania przepuszczalności jelit u myszy

8 lipca 2025

W tym artykule

Streszczenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Źródło: Boerner, K., et al. Funkcjonalna ocena przepuszczalności jelit i migracji przeznabłonkowej neutrofili u myszy przy użyciu standaryzowanego modelu pętli jelitowej. J. Vis. Exp. (2021)

Ten film demonstruje generowanie modelu pętli jelita krętego do badania przepuszczalności jelit w modelu mysim. Metoda ta zapewnia żywy model do zrozumienia funkcji bariery nabłonkowej i wynikającej z niej odpowiedzi immunologicznej.

Protokół

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Generowanie pętli jelita krętego

  1. Przygotowanie skóry: Wyszoruj sierść linii środkowej brzucha wacikami nasączonymi alkoholem lub gąbką z gazy nasączoną 70% etanolem. Nie zwilżaj dużego obszaru futra alkoholem, aby zapobiec hipotermii.
  2. Za pomocą nożyczek wykonaj laparotomię w linii środkowej. Wykonaj pionowe nacięcie na środku brzucha (około 2 cm długości) i odsłoń otrzewną. Uważaj, aby nie uszkodzić narządów wewnątrz jamy brzusznej.
  3. Umieść wstępnie przyciętą mokrą bawełnianą gazę na odsłoniętej jamie brzusznej.
  4. Użyj mokrych bawełnianych wacików, aby zmobilizować i uwidocznić kątnicę. Ostrożnie umieść kątnicę na mokrej bawełnianej gazie.
    nuta: Kątnica jest zlokalizowana w lewym kwadrancie ogonowym jamy brzusznej u większości myszy, niezależnie od płci zwierzęcia.
  5. Użyj mokrych bawełnianych wacików, aby zmobilizować i delikatnie zewnętrzizować jelito kręte, którego odcinek końcowy (dystalny koniec) jest przymocowany do kątnicy (ryc. 1B).
  6. Rozłóż co najmniej 6 cm końcowego odcinka jelita krętego na mokrej gazie bawełnianej bez przerywania naczyń krezkowych i dopływu krwi. Dopływ krwi jest utrzymany, jeśli nie ma krwawienia, a tkanka zachowuje swój różowy kolor (ryc. 1B).
    nuta: Unikaj wysuszania odsłoniętych tkanek, utrzymując tkanki wilgotne przez cały czas ciepłym HBSS (co 2 - 3 min) za pomocą strzykawki o pojemności 10 ml podłączonej do żółtej rurki do karmienia.
  7. W pobliżu kątnicy zidentyfikuj główną tętnicę w krezce, dostarczającą krew do jelita krętego. Następnie zlokalizuj dwa miejsca podwiązania w krezce, które są wolne od krytycznych naczyń krwionośnych.
  8. Za pomocą kleszczyków tkankowych mocno chwyć końcowe jelito kręte (najbliżej kątnicy) i za pomocą kleszczyków z cienką końcówką fenestruj krezkę, unikając naczyń krwionośnych. Umieść jedwabny szew w poprzek perforacji i zawiąż węzeł chirurgiczny, aby utworzyć pierwsze podwiązanie (dystalny koniec pętli).
  9. Za pomocą linijki zmierz odległość 4 cm od pierwszej ligatury i utwórz drugą ligaturę (bliższy koniec pętli), jak wspomniano w kroku 2.8 (Rysunek 1C).
  10. Cienkimi nożyczkami ostrożnie przyciąć obok każdego podwiązania, aby odizolować 4-centymetrową pętlę jelita krętego, zachowując nienaruszone ukrwienie i błonę krezkową.
    nuta: Odetnij oba końce zewnętrznego segmentu iLoop, a następnie delikatnie przepłucz jako niezbędny krok, który zapobiega interferencji zawartości światła (kału), ułatwiając w ten sposób równomierne rozproszenie FITC-dekstranu lub bodźców chemotaktycznych na całej długości izolowanego segmentu, a także umożliwiając dokładniejsze określenie ilościowe leukocytów za pomocą cytometrii przepływowej. Procedura ta pozwala również na równomierne rozdęcie błony śluzowej po wstrzyknięciu określonych objętości odczynnika i lepszą odtwarzalność między zwierzętami.
  11. Delikatnie przepłukać zawartość segmentu pętli jelita krętego ciepłym HBSS za pomocą elastycznej żółtej rurki do karmienia dołączonej do strzykawki o pojemności 10 ml.
  12. Podwiązać dwa odcięte końce zaczerwienionej pętli jelita krętego za pomocą jedwabnego szwu.
  13. Za pomocą strzykawki o pojemności 1 ml z igłą 30 G powoli wstrzyknąć 250 μl odczynnika, takiego jak dekstran FITC lub chemokina, do światła jelita. Pętla jelita krętego napełni się, powodując umiarkowane rozdęcie błony śluzowej (ryc. 1D).
    nuta: Wstrzyknąć odczynnik do światła pętli po przeciwnej stronie tętnicy krezkowej. Należy uważać, aby nie wyciągnąć pętli jelita krętego ze zwierzęcia podczas wstrzykiwania, aby uniknąć rozerwania naczyń krwionośnych i wywołania krwawienia.
  14. Za pomocą mokrych bawełnianych wacików delikatnie załóż pętlę jelita krętego, proksymalną część jelita krętego i kątnicę.
  15. Użyj uchwytu na igłę, anatomicznych kleszczyków i niewchłanialnych jedwabnych szwów 3,0 z igłą do odwrotnego cięcia, aby zamknąć ścianę brzucha.
  16. Umieść zwierzę w komorze anestezjologicznej o regulowanej temperaturze na okres inkubacji.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
Rysunek 1: Model pętli jelita krętego. (A) Schematyczny przegląd modelu pętli jelita krętego. Laparotomia środkowa jest wykonywana na myszach w znieczuleniu i umieszczana na tablicy chirurgicznej z kontrolowaną temperaturą. (B) Eksterioryzacja kątnicy (*), jelita krętego i krezki. Zidentyfikowano dwa odpowiednie miejsca do podwiązania (1,2). (C) Wyizolować odcinek o długości 4 cm: pierwszą ligaturę ...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Nie stwierdzono konfliktu interesów.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Sprzęt i materiały
Waciki nasączone alkoholem BDBd326895
Igła BD PrecisionGlide, 25G x 5/8"Bd305122
Igła BD PrecisionGlide, 30G x 1/2"Bd305106
BD 1ml Strzykawka tuberkulinowa bez igłyBd309659
15 ml probówka wirówkowaCorning14-959-53A
Corning 96-dołkowa solidna płytka polistyrenowaFisherScientific07-200-592
Naczynie hodowlane Corning bez obróbki, 10 cmMiliporeSigmaCLS430588
Aplikator z bawełnianą końcówką (wacik), 6", sterylnyFisherScientific25806 2WC
Gąbki z gazy Dynarex wypełnione bawełną, niesterylne, 2 "x 2"Targi Medex3249-1
Parownik anestezjologiczny EZ-7000 (system klasyczny, w tym jednostki grzewcze)Systemy E-ZEZ-7000
Cienkie nożyczki MoriaCertyfikat FSTNumer katalogowy 14370-22
Puralube Maść weterynaryjna, sterylny lubrykant do oczuDechra (Głuch)12920060
Kleszcze pierścieniowe (kleszcze do tkanek)Certyfikat FSTNumer katalogowy: 11103-09
Roboz Surgical 4-0 Jedwabny pleciony, 100 YDFisherScientificNC9452680
Kleszcze Semken (kleszcze anatomiczne)Certyfikat FSTRozdział 1108-13
Sofsilk Niewchłanialny powlekany szew pleciony jedwab Rozmiar 3-0, 18 ", igła 19mm długość 3/8 koło odwrotne cięcie Henryk ScheinZobacz materiał SS694
Kleszcze studenckie cienkie, kątoweCertyfikat FSTNumer katalogowy 91110-10
Strzykawka 10ml PP/PE bez igłyMillipore Sigma Z248029
Żółte rurki do karmienia gryzoni 20G x 30 mmInstechFTP-20-30 (protokół FTP-20-30
Roztwory i
Zrównoważony roztwór soli HanksaCorning21-023-CV
Sól fizjologiczna buforowana fosforanami bez wapnia i magnezuCorning21-040-CV
IzofluranHalowęglowodórNumer katalogowy: 12164-002-25
)

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

Ileal Loop ModelIntestinal PermeabilityMouse ModelSurgical ProcedureMesenteric LigationChemokine InjectionFITC dextran AssayAbdominal IncisionTissue ExteriorizationLoop Flushing

Powiązane artykuły