Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.
1. Aby umożliwić królikom aklimatyzację w krępach i obiektywne potwierdzenie stabilizacji częstości krążeń krążeniowo-oddechowych, wyposażyć wszystkie króliki w czujniki krążeniowo-oddechowe i neuronalne i przeprowadzić ciągły monitoring wideo przez > 1 godzinę, 1 - 3 razy na zwierzę.
2. Eksperyment z dożylnym podawaniem leków (Pentylenotetrazol, PTZ)
- Aby uwidocznić żyłę ucha brzeżnego, ogol tylną powierzchnię ucha królika. Użyj chusteczki z 70% etanolu, aby zdezynfekować miejsce i rozszerzyć żyłę brzeżną ucha. Wskazuje na to przerywany owal na rysunku 1F.
- W tym momencie niech jeden eksperymentator zakryje twarz królika ręką, aby zmniejszyć stres związany z procedurą dla królika. Drugi eksperymentator ostrożnie kaniuluje żyłę brzeżną za pomocą sterylnego angiocewnika 25-G.
- Gdy cewnik znajdzie się w żyle, umieść sterylny korek do wstrzykiwań na końcu cewnika, aby igła mogła wprowadzić lek dożylnie. Położenie korka wtryskowego jest oznaczone niebieskim kółkiem na rysunku 1G.
- Wykonaj szynę, owijając gazę o wymiarach 4 x 4 cale taśmą tak, aby tworzyła kształt rurki i umieszczając ją w uchu królika. Następnie przyklej szynę do ucha tak, aby cewnik był zamocowany na miejscu i pozostał w pozycji pionowej, podobnie jak w przypadku ucha niecewnikowanego.
- Wstrzyknąć 1 ml 10 jednostek USP na ml heparynizowanej soli fizjologicznej.
nuta: Cewnik i naczynie powinny być w widoczny sposób oczyszczone z powietrza i pozostać przezroczyste. Jeśli cewnik nie znajduje się w naczyniu, strzykawka nie będzie się łatwo przepychać i dojdzie do nagromadzenia soli fizjologicznej w tkance podskórnej.
- Podawać królikom kolejne dawki PTZ dożylnie od 1 mg/kg do 10 mg/kg mc. w odstępach co 1 mg/kg co 10 minut. Na początku każdej dawki należy zanotować, któremu zwierzęciu wstrzykuje się lek i jakie jest stężenie leku.
nuta: Umożliwia to ocenę ostrych i addytywnych skutków podawania PTZ. Alternatywnie, w celu dalszej oceny przewlekłych skutków PTZ w niskich dawkach, królikowi podaje się dawki powtarzane przy każdym stężeniu niskiej dawki, 7 dawek po 2 mg/kg mc., 3 dawki po 5 mg/kg mc., a następnie 3 dawki po 10 mg/kg mc., przy czym każda dawka jest oddzielona o 10 min.
- Po każdej dawce należy uważnie monitorować wideo-EEG-EKG-kapnografię-oksymetrię pod kątem wszelkich nieprawidłowości neuro-sercowych, elektrycznych i oddechowych oraz wizualnych dowodów aktywności padaczkowej. Zwróć uwagę na te zmiany w czasie rzeczywistym i podczas analizy końcowej.
nuta: Aktywność napadowa często rozpoczyna się w ciągu 60 sekund od podania PTZ.
