Wielosystemowe monitorowanie nieprawidłowości padaczkowych u królików: metoda jednoczesnego zapisu wideo EEG, EKG, kapnografii i oksymetrii podczas napadów indukowanych

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Aby umożliwić królikom aklimatyzację w krępach i obiektywne potwierdzenie stabilizacji częstości krążeń krążeniowo-oddechowych, wyposażyć wszystkie króliki w czujniki krążeniowo-oddechowe i neuronalne i przeprowadzić ciągły monitoring wideo przez > 1 godzinę, 1 - 3 razy na zwierzę.

2. Eksperyment z dożylnym podawaniem leków (Pentylenotetrazol, PTZ)

1. Aby uwidocznić żyłę ucha brzeżnego, ogol tylną powierzchnię ucha królika. Użyj chusteczki z 70% etanolu, aby zdezynfekować miejsce i rozszerzyć żyłę brzeżną ucha. Wskazuje na to przerywany owal na rysunku 1F.
2. W tym momencie niech jeden eksperymentator zakryje twarz królika ręką, aby zmniejszyć stres związany z procedurą dla królika. Drugi eksperymentator ostrożnie kaniuluje żyłę brzeżną za pomocą sterylnego angiocewnika 25-G.
3. Gdy cewnik znajdzie się w żyle, umieść sterylny korek do wstrzykiwań na końcu cewnika, aby igła mogła wprowadzić lek dożylnie. Położenie korka wtryskowego jest oznaczone niebieskim kółkiem na rysunku 1G.
4. Wykonaj szynę, owijając gazę o wymiarach 4 x 4 cale taśmą tak, aby tworzyła kształt rurki i umieszczając ją w uchu królika. Następnie przyklej szynę do ucha tak, aby cewnik był zamocowany na miejscu i pozostał w pozycji pionowej, podobnie jak w przypadku ucha niecewnikowanego.
5. Wstrzyknąć 1 ml 10 jednostek USP na ml heparynizowanej soli fizjologicznej.
   nuta: Cewnik i naczynie powinny być w widoczny sposób oczyszczone z powietrza i pozostać przezroczyste. Jeśli cewnik nie znajduje się w naczyniu, strzykawka nie będzie się łatwo przepychać i dojdzie do nagromadzenia soli fizjologicznej w tkance podskórnej.
6. Podawać królikom kolejne dawki PTZ dożylnie od 1 mg/kg do 10 mg/kg mc. w odstępach co 1 mg/kg co 10 minut. Na początku każdej dawki należy zanotować, któremu zwierzęciu wstrzykuje się lek i jakie jest stężenie leku.
   nuta: Umożliwia to ocenę ostrych i addytywnych skutków podawania PTZ. Alternatywnie, w celu dalszej oceny przewlekłych skutków PTZ w niskich dawkach, królikowi podaje się dawki powtarzane przy każdym stężeniu niskiej dawki, 7 dawek po 2 mg/kg mc., 3 dawki po 5 mg/kg mc., a następnie 3 dawki po 10 mg/kg mc., przy czym każda dawka jest oddzielona o 10 min.
7. Po każdej dawce należy uważnie monitorować wideo-EEG-EKG-kapnografię-oksymetrię pod kątem wszelkich nieprawidłowości neuro-sercowych, elektrycznych i oddechowych oraz wizualnych dowodów aktywności padaczkowej. Zwróć uwagę na te zmiany w czasie rzeczywistym i podczas analizy końcowej.
   nuta: Aktywność napadowa często rozpoczyna się w ciągu 60 sekund od podania PTZ.

Rysunek 1: Królik podłączony do sprzętu.(A) Lokalizacja elektrod EKG, lewe ramię jest oznaczone żółtą kropką. Prawe ramię jest oznaczone białą kropką. Lewa noga jest oznaczona czerwoną kropką. Podłoże przed prawą nogą jest oznaczone zieloną kropką. (B) Królik w unieruchomieniu z podłączonymi elektrodami EKG i EEG. (C) Młodociany królik w uwięzi z odpowiednimi modyfikacjami w celu pomieszczenia dla mniejszego królika, w tym wzmacniaczem pod królikiem, pianką na szyję i przeciętą rurą PVC. (D) Królik w unieruchomieniu z umiejscowieniem elektrod EEG. Prawy przód jest oznaczony pomarańczową kropką. Lewy przód jest oznaczony czerwoną kropką. Prawa potyliczna jest oznaczona żółtą kropką. Lewa potyliczna jest oznaczona niebieską kropką. Odniesienie jest oznaczone czarną kropką. (E) Królik w unieruchomieniu ze stymulatorem fototycznym i ustawieniem kabiny lustrzanej. Źródło światła oznaczone jest białą kropką. (F) Żyła brzeżna ucha po ogoleniu ucha królika i przetarciu alkoholem. (G) Królik z cewnikiem naczyniościennym bezpiecznie przyklejonym do lewej żyły ucha brzeżnego. Miejsce podania korka iniekcyjnego jest oznaczone niebieską kropką. (H) Królik z maską na twarz przymocowaną do rurki kapnograficznej za pomocą trójnika zawierającego zawór jednokierunkowy. (I) Schemat maski na twarz i trójnika połączonych z rurką kapnograficzną. Podczas wdechu powietrze z pomieszczenia może dostać się do trójnika przez zawór jednokierunkowy (zielona strzałka). Podczas wydechu CO2 opuszcza trójnik, wchodząc do rurki kapnograficznej (żółta strzałka). Ze względu na niewielką ilość martwej przestrzeni, bardzo mało CO2 jest zatrzymywane w trójniku i wynosi zwykle mniej niż 5 mmHg.