Izolacja guzika rogówkowo-twardówkowego: zabieg chirurgiczny mający na celu uzyskanie guzika rogówkowo-twardówkowego z oka świni

Streszczenie

Źródło: Okurowska, K., et al. Establishing a Porcine Ex Vivo Cornea Model for Study Drug Treatments against Bacterial Keratitis. J. Vis. Exp. (2020).

W tym filmie pokazujemy procedurę chirurgicznego izolowania guzika rogówkowo-twardówkowego w celu wygenerowania ex vivo modelu rogówki świni. Model jest pomocny w badaniach histologicznych, patologicznych i farmakologicznych ze względu na podobieństwo do ludzkiego oka.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Sterylizacja

1. ETAP KRYTYCZNY: Zdezynfekować wszystkie kleszcze i nożyczki mocząc przez 1 godzinę w 5% (v/v) roztworze Distel w wodzie destylowanej, oczyścić szczotką, spłukać wodą z kranu i sterylizować w piekarniku w temperaturze 185 °C przez co najmniej 2 godziny.
2. Wysterylizować wszystkie inne naczynia szklane i odczynniki przez autoklawowanie w temperaturze 121 °C przez 15 minut lub przygotować odczynniki zgodnie z instrukcjami producenta. Przeprowadzić następujące procedury w komorze bezpieczeństwa mikrobiologicznego klasy II.

2. Pobieranie próbek

1. Kolekcja oczu świni
   1. Użyto dużych białych loch landrace, krzyżówki z knem Hampshire. Zwierzęta zostały ogłuszone prądem elektrycznym, a oczy zostały wyłuszczone 2 godziny później w rzeźni.
   2. ETAP KRYTYCZNY: Po wyłuszczeniu przenieś oczy do laboratorium w sterylnym roztworze soli fizjologicznej buforowanej fosforanem (PBS), aby zapobiec ich wysychaniu i przetwarzaj je natychmiast po przybyciu.

3. Przygotowanie guzika korneotwardówkowego

1. Użyj sterylnych kleszczy, aby przytrzymać tkankę otaczającą gałkę oczną i przenieś ją na szalkę Petriego. Usuń spojówkę i tkankę mięśniową wokół gałki ocznej na szalce Petriego za pomocą ostrza skalpela nr 15 i kleszczy.
2. Delikatnie unieś gałkę oczną, trzymając nerw wzrokowy kleszczami i przenieś do 0,5 litrowego słoika wypełnionego sterylnym PBS.
3. Gdy wszystkie oczy zostaną oczyszczone z otaczających tkanek, przenieś je za pomocą sterylnych kleszczy do innego 0,5 litra słoika wypełnionego 3% (v/v) jodowidonem w PBS i pozostaw na 1 minutę.
4. Przenieś gałki oczne do innego słoika o pojemności 0,5 l ze sterylnym PBS.
5. Za pomocą kleszczy przytrzymuj oko nieruchomo na szalce Petriego i wykonaj nacięcie w pobliżu rogówki ostrzem skalpela nr 10A.
6. KRYTYCZNY KROK: Przytrzymaj krawędź nacięcia i użyj nożyczek, aby wyciąć rogówkę, pozostawiając około 3 mm twardówki otaczającej rogówkę. Upewnij się, że ostry koniec nożyczek nie przebija tęczówki ani tkanki naczyniówki i znajduje się w przestrzeni nadnaczyniówkowej.
7. Przytrzymaj guzik korneotwardówkowy kleszczami i użyj innej pary kleszczy ze spiczastym końcem, aby delikatnie oddzielić tkankę błony naczyniowej oka.
8. Wyjmij guzik korowo-twardówkowy z pozostałej kuli i krótko przepłucz go w 1,5% (v/v) roztworze jodu powidonu w PBS na 12-dołkowej płytce.
9. Umieść guzik rogowo-twardówkowy w innej 12-dołkowej płytce wypełnionej sterylnym PBS.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Płytka 12-dołkowa Cellstar	Greiner Bio-One	Numer katalogowy: 665180
Dystelacja	Fisher Naukowy	12899357
Kleszcze	Fisher Naukowy	15307805
Pbs	Sls	Zobacz materiał P4417
szalka Petriego	Fisher Naukowy	12664785
Jod powidonu	Apteka Weldricks	2122828
Ostrze skalpela numer 15	Fisher Naukowy	O305
Skalpel Swann Morton	Fisher Naukowy	11849002

powiedział: