Ekstrakcja tkanki oskrzelowej świni: procedura polegająca na wypreparowaniu skrawków tkanki oskrzelikowej z płuc świń

Streszczenie

Źródło: Harrington, N. E. et al. Testowanie skuteczności antybiotyków w modelu ex vivo biofilmów Pseudomonas aeruginosa i Staphylococcus aureus w płucach mukowiscydozy. J. Vis. Exp. (2021)

W tym filmie opisujemy zabieg chirurgiczny polegający na ekstrakcji tkanek oskrzelików z pobranego płuca świni. Tkanka oskrzelików ex vivo może zostać wykorzystana do opracowania modeli infekcji do badania przewlekłych infekcji płuc.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Sekcja tkanki płuc świni ex vivo (EVPL)

1. Płuca należy pozyskać z wyznaczonego źródła tak szybko, jak to możliwe po uboju, upewniając się, że są one przechowywane w niskiej temperaturze, transportując je do laboratorium w domowej lodówce.
   nuta: Płuca znajdujące się bliżej dnia uboju wykazują mniej siniaków spowodowanych przechowywaniem, ale można również wykorzystać tkanki przechowywane w chłodni przez okres do 4 dni od uboju. Ponieważ pojemnik chłodzący musi zostać zabrany do sklepu mięsnego lub rzeźni, po każdym użyciu musi zostać odkażony zgodnie z lokalnymi wytycznymi laboratoryjnymi i przechowywany poza laboratorium mikrobiologicznym, gdy nie jest używany, aby zmniejszyć ryzyko zanieczyszczenia i naruszenia zabezpieczeń.
2. Pracując na wysterylizowanej powierzchni i pod płomieniem, umieść płuca na czystej plastikowej desce do krojenia pokrytej autoklawowaną folią aluminiową. Sprawdź, czy oskrzeliki pozostają nienaruszone. Jeśli doszło do jakiegokolwiek uszkodzenia w rzeźni lub podczas transportu, płuca nie nadają się do użytku.
3. Podgrzej szpachlówkę pod płomieniem i bardzo krótko przyłóż nóż do obszaru płuca otaczającego oskrzelik, aby wysterylizować powierzchnię tkanki.
4. Odetnij tkankę powierzchniową otaczającą oskrzelik za pomocą sterylnie zamontowanej żyletki. Wykonuj nacięcia równolegle do oskrzelików, aby zapobiec uszkodzeniom.
5. Po odsłonięciu oskrzelików wykonaj nacięcie przekroju poprzecznego przez oskrzelik w najwyższym widocznym punkcie, aby uwolnić oskrzelik.
6. Za pomocą sterylnych kleszczy lekko przytrzymaj wolny koniec oskrzelika i odetnij pozostałą niechcianą tkankę za pomocą sterylnie zamontowanej żyletki. Wykonaj ostatnie nacięcie w przekroju poprzecznym w poprzek oskrzelików, zanim widoczne będą jakiekolwiek rozgałęzienia, aby usunąć oskrzeliki z płuc.
7. Umieść oskrzelik w pierwszym płukaniu DMEM/RPMI 1640. Pozostawić oskrzelik w płuczce i powtórzyć kroki 1,2-1,5, aby pobrać dodatkowe skrawki oskrzelików z tego samego płuca, zgodnie z wymaganiami, aby uzyskać wystarczającą ilość skrawków tkanki.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
70% etanol lub podobny do sterylizacji powierzchni i sprzętu do preparacji flamin gof
Folia aluminiowa - wstępnie wysterylizowana w autoklawie - do przykrycia deski do krojenia, na której będziesz przeprowadzać sekcję płuc
Palnik Bunsena
Deska do krojenia - polecamy deskę z tworzywa sztucznego, aby umożliwić łatwą dekontaminację alkoholem.
Lodówka do transportu płuc do laboratorium
Nożyczki preparacyjne w różnych rozmiarach
Zmodyfikowane podłoże Eagle firmy Dulbecco (DMEM)
Fisherbrand 2 ml wzmocnione probówki	Rybak termiczny	15545809
Duży nóż do palet
Zamontowane żyletki
Plastikowa deska do krojenia i folia aluminiowa tworzą sterylną i łatwą do czyszczenia powierzchnię do rozwarstwiania
Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 średni
Dobór kleszczy (zalecane końcówki)
Odpowiednie pojemniki do utylizacji zanieczyszczonych ostrych narzędzi i tkanek wieprzowych, zgodnie z polityką bezpieczeństwa i higieny pracy Twojej instytucji.