Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.
Badanie zostało przeprowadzone na sześciu trzymiesięcznych świniach płci męskiej i żeńskiej (German Landrace) o wadze około 40 kg. Zwierzęta zostały przywiezione do placówek opieki nad zwierzętami co najmniej 7 dni przed eksperymentami i były trzymane zgodnie z zaleceniami dotyczącymi dobrostanu zwierząt. Zwierzętom dostarczano jedzenie i wodę ad libitum, a ich stan zdrowia był regularnie oceniany przez odpowiedzialnego lekarza weterynarii. Przed eksperymentami utrzymywano czas postu wynoszący 12 godzin. Cała procedura doświadczalna i obchodzenie się ze zwierzętami były nadzorowane przez odpowiedzialnego lekarza weterynarii.
1. Indukcja znieczulenia i utrzymanie znieczulenia
- W celu indukcji znieczulenia i utrzymania znieczulenia należy wstępnie medykować zwierzęta i głęboko je uspokajać za pomocą wstrzyknięcia domięśniowego, a następnie wstrzyknięć dożylnych, jeśli to konieczne, w celu wykonania intubacji dotchawiczej. Następnie należy wywołać i utrzymać znieczulenie, stosując kombinację lotnego środka znieczulającego z ciągłym podawaniem opioidów uzupełnionym dodatkowym wstrzyknięciem bolusa opioidowego.
- Wykonaj domięśniowe wstrzyknięcia ketaminy 20 mg·kg-1, azaperonu 4 mg·kg-1 i midazolamu 0,1 mg·kg-1 w celu premedykacji i uspokojenia.
2. Umieszczenie sondy
- Ustaw zwierzę w odpowiedniej pozycji bocznej i zegnij grzbiet zwierzęcia, aby poszerzyć przestrzeń między kręgami.
- W celu przezskórnego umieszczenia drenażu płynu mózgowo-rdzeniowego w celu pomiaru i kontroli ciśnienia mózgowo-rdzeniowego, określ poziom L 4/5 lub L 5/6, nakłuj skórę i przestrzeń podskórną igłą wprowadzającą i wyjmij igłę wkładu.
- Umieścić strzykawkę wypełnioną solą fizjologiczną na igle i ostrożnie wprowadzić igłę, stale naciskając na strzykawkę wypełnioną płynem.
- Gdy utrata oporu zostanie wyczuta jako dowód na ułożenie zewnątrzoponowe, ponownie wprowadź igłę do wkładu i wprowadź igłę 2-3 mm dalej, aby nakłuć oponę twardą i usunąć igłę wkładu.
- Sprawdź pozycję dooponową, szybko kapiąc klarownym alkoholem. Wprowadzić drenaż na głębokość do 20 cm, założyć adapter Luer-lock i sprawdzić położenie poprzez staranne zasysanie płynu.
- Ostrożnie przymocuj drenaż za pomocą szwów i podłącz go do systemu drenażu płynu mózgowo-rdzeniowego.