Izolacja kompleksu oocytów Cumulusa świni: technika izolacji kompleksu oocytów Cumulus z pęcherzyka jajnika świni w celu zapłodnienia in vitro

Streszczenie

Źródło: Gorczyca, G. et al., Proteolitycznie zdegradowane hydrożele alginianowe i hydrofobowe mikrobioreaktory do enkapsulacji oocytów świń. J. Vis. Exp. (2020).

Ten film opisuje technikę izolowania kompleksu wzgórko-oocytów lub COC z jajników świni. Wyizolowany nienaruszony COC może być wykorzystany do przeprowadzenia zapłodnienia in vitro - techniki wspomaganego rozrodu w celu opracowania metod leczenia niepłodności.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Izolacja kompleksów cumulus-oocyty świń

1. Aby pobrać materiał do izolacji pęcherzyków jajnikowych, należy wyciąć jajniki świń od loszek przed okresem dojrzewania (w wieku około 6-7 miesięcy, o wadze od 70 do 80 kg) w lokalnej rzeźni. Wybierz około 20 jajników świni z 10 zwierząt do izolacji kompleksów wzgórko-oocytów (COC) w każdym eksperymencie.
   nuta: Zakładając, że każdy jajnik daje 3–5 pęcherzyków, całkowita liczba pęcherzyków waha ....

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Ogólne
Antybiotyk Przeciwgrzybicze (100x) 100ml	Rybak termiczny	15240062	2,5% stężenie końcowe dla podłoża manipulacyjnego. 1% w PBS (krok 1.2)
DMEM/F12 (500 ml)	Sigma-Aldrich	Zobacz materiał D8062	Obsługa medium
FCS (100 ml)	Rybak termiczny	16140063	10% stężenie końcowe dla medium manipulacyjnego. (krok: 1.5)
PBS (1x, pH 7,4) 500ml	Rybak termiczny	10010023
Podłoże do dojrzewania
hCG (1 fiolka 10 000 j.)	Sigma-Aldrich	CG10
PMSG (Międzynarodowa Organizacja Zarządzania	Dostawca biologiczny	RP1782721000
Konkretne instrumenty, narzędzia
Czasza Pteri 30 mm	TPP (TPP)	Numer katalogowy: 93040
60 mm IVF szalka Petriego	sokół	353653
inkubator	Panasonic	MCO-170AIC-PE	Można użyć innych marek
Sterylna szalka Petriego (10 cm)	NEST Biotechnologia	704002
termos	Keczua	5602589	Można użyć innych marek

powiedział: T