Izolacja aorty świń: zabieg chirurgiczny polegający na wycięciu aorty piersiowej od miniaturowych świń w celu dalszej analizy

W tym artykule

Streszczenie

Źródło: Zhao, Y., et al. Izolacja i hodowla pierwotnych komórek śródbłonka aorty od miniaturowych świń J. Vis. Exp. (2019 rok)

W tym filmie demonstrujemy procedurę chirurgicznego usuwania aorty u miniaturowych świń. Komórki śródbłonka pobrane z tych izolowanych aort mogą być dalej hodowane w warunkach in vitro w celu zbadania krzepnięcia i odpowiedzi immunologicznej.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Chirurgia i przygotowanie do izolacji komórek śródbłonka aorty świń

Dezynfekcja sali operacyjnej światłem UV przez 1 h oraz płynem do dezynfekcji medycznej 84 (dostępna zawartość chloru to 4,0% - 5,0%, Tabela Materiałów) przed wykonaniem zabiegu.
Po tym, jak miniaturowa świnia otrzymała wstrzyknięcie domięśniowe składające się z 15 mg/kg ketaminy, 15 mg/kg chlorowodorku ksylazyny i 0,05 mg/kg chlorowodorku fenacetyny (objętości: 100 μL/kg, tabela materiałów) (Rysunek 1A), potwierdź stan znieczulenia zwierzęcia, sprawdzając bolesny bodziec świński (np. szczypanie jednego ucha lub potrząsanie jedną kończyną przednią) i indeks fizjologiczny (np. ciśnienie krwi, tętno i częstość oddechów).
nuta: Kolejne pół dawki wstrzyknięcia można podać świni, jeśli wykazuje ona oznaki przebudzenia.
Przeciąć brzuch skalpelem, odsłonić żyłę główną dolną i w konsekwencji wstrzyknąć heparynę sodową (5000 j., tabela materiałów) do żyły głównej dolnej za pomocą strzykawki o pojemności 5 ml.
Pięć minut później włóż cewnik do aorty brzusznej do krwi, przetnij skórę klatki piersiowej i nacinaj przeponę skalpelem, a następnie odetnij lewą komorę.
nuta: Upewnij się, że świnia została poddana eutanazji, sprawdzając tętno aorty po przekrwieniu i przecięciu serca.
Żebra należy wyciąć kleszczami do kości (tabela materiałów) i odsłonić serce i płuca. Znajdź aortę za sercem i płucami i zaciśnij oba końce. Przemyć aortę raz wstępnie schłodzonym buforem płuczącym - 1x roztwór PBS (pH 7,4) z 1% (v/v) penicyliną/streptomycyną. (Rysunek 1B,C).
Wytnij aortę nożyczkami i trzymaj aortę zaciśniętą na każdym końcu. Wytnij nadmiar tkanki wokół aorty za pomocą sterylnych kleszczy i nożyczek. Umieścić aortę w probówce wirówkowej o pojemności 50 ml, przemyć aortę wstępnie schłodzonym buforem płuczącym 3x (30 ml na płukanie) i przenieść aortę do laboratorium (ryc. 1D).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

figure-results-1
Ryc. 1: Zabieg chirurgiczny i wycięcie aorty od miniaturowej świni. (A) Zdjęcie miniaturowej świnki (Bama). (B) Aorta jest odsłonięta po laparotomii i torakotomii. (C) Aorta jest zaciśnięta na każdym końcu. (D) Aortę umieszcza się w probówce o pojemności 50 ml z buforem do płukania na zimno.