Izolacja komórek śródbłonka aorty świń (pAEC): oparta na enzymach metoda izolowania komórek śródbłonka z pobranej aorty brzusznej świni

Streszczenie

Źródło: Zhao, Y. et al. Izolacja i hodowla pierwotnych komórek śródbłonka aorty od miniaturowych świń. J. Vis. Exp. (2019)

W tym filmie pokazujemy izolację komórek śródbłonka z aorty brzusznej modelu świni za pomocą jednoetapowego trawienia kolagenazy. Komórki śródbłonka mogą być hodowane do dalszych zastosowań.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Izolacja komórek śródbłonka aorty świń

1. W warunkach aseptycznych należy wyjąć aortę świni z bufora do płukania i umieścić ją na szalce Petriego o średnicy 150 mm (ryc. 1A).
2. Delikatnie odetnij dwa końce aorty i ponownie wytnij nadmiar tkanki wokół aorty za pomocą sterylnych kleszczyków i nożyczek (ryc. 1B). Przemyć zewnętrzną i wewnętrzną stronę aorty (nad naczyniem hodowlanym w temperaturze pokojowej) 20−50 ml bufo....

Wyniki

Rycina 1: Trawienie aorty świń i izolacja pAEC. oraz Aortę umieszcza się na szalce Petriego o średnicy 150 mm z buforem do płukania na zimno. (B) Fotografia aorty świń po usunięciu tkanki łącznej. oraz Szklany pręt przewiązany sterylnym szwem chirur.......

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Skrobak do komórek	Corning	3010#
Kolagenaza IV	Sigma-Aldrich	C5138#-1G
DMEM (DMEM)	Technologie życiowe	11965118#
Naczynie do hodowli komórkowych Falcon 100 mm	Corning	353003#
Szalki Petriego (150 x 15 mm)	Biologixgroup (grupa biologiczna)	66-1515#
Kleszcze	Instrumenty medyczne ShangHai Co., Ltd.China
Prostokątna kolba do hodowli komórkowych z przechyloną szyjką i nasadką odpowietrzającą (T25)	Corning	3289#
nożyczki	Instrumenty medyczne ShangHai Co., Ltd.China
Pipety do transferu serologicznego (10ml)	JET Biofil	GSP010010#
Sterylna pipeta Pasteura	Cegła GeneBrick	GY0025#
Szew chirurgiczny	Szanghaj Pudong Jinhuan Zaopatrzenie Medyczne Co., Ltd	5-0#
20 x roztwór PBS (pH 7,4, bez nukleaz)	Sangon Biotechnologia	B540627#
Penicylina/Streptomycyna	Technologie życiowe	15070063#