Rozmrażanie zarodków królików: procedura rozgrzewająca w celu odzyskania kriokonserwowanych zarodków królików do transferu zarodków

Streszczenie

Źródło: Garcia-Dominguez, X. et al., Minimalnie inwazyjny transfer zarodków i witryfikacja zarodków w optymalnym stadium zarodka w modelu królika. J. Vis. Exp. (2019)

Ten film pokazuje procedurę rozmrażania zeszklonych zarodków królika oraz kroki zapobiegawcze dla optymalnego odzyskiwania zarodków.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Ocieplanie zarodków

1. Rozmrozić zarodki w jednym kroku.
   1. Ustaw tester poziomo w odległości 10 cm od oparów ciekłego azotu na 20-30 s.
   2. Gdy proces krystalizacji rozpocznie się wewnątrz ministrawy, zanurz go w łaźni wodnej o temperaturze 25°C na 10-15 s.
   3. Wyjmij zatyczkę ministerstwa i odetnij bawełnianą zatyczkę.
   4. Za pomocą sprzężonego mikrodozownika wylać całą zawartość porcji do płytki zawierającej 0,33 M roztwór sacharozy w temperaturze 25°C w BM przez 5 minut.
      nuta: Ten krok należy wykonać szybko, aby zmniejszyć narażenie zarodków na roztwór witryfikacyjny.
   5. Przenieść zarodki na nową płytkę zawierającą roztwór BM na kolejne 5 minut.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Ciekły azot	Air Liquide	P1505XXX
Szalki Petriego, 35 mm	Sigma Aldrich	CLS430165-500EA
Opatrunek z tworzywa sztucznego (Nobecutan)	IBOR medica	7140028
Słomka plastikowa 0,25 ml	IMV - technologie	Numer katalogowy: 6431
nożyczki	ROBOZ	Złącze RS-5880	Sprawdzi się każde zwykłe małe proste nożyczki ze stali chirurgicznej.
Sterylne rękawiczki	Alvet Escartí	Numer katalogowy: 087GL010075
Sterylny fartuch	Alvet Escartí	12261501
Sterylna maska	Alvet Escartí	058B15924B
Zatyczka słomkowa	IMV - technologie	Numer katalogowy: 6431
sacharoza	Sigma Aldrich	Zobacz materiał S7903
Kąpiel wodna	RAYPA (RAYPA)	BAE-4
Solanka fizjologiczna buforowana fosforanami (DPBS) firmy Dulbecco	Sigma Aldrich	Zobacz materiał D5773	Bez chlorku wapnia.