Method Article

Binarna transformacja genów oparta na sztucznym wektorze chromosomowym u roślin Arabidopsis: technika generowania roślin transgenicznych z insercją pojedynczej kopii

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Źródło: Tark-Dame, M., et al. Generowanie roślin transgenicznych z pojedynczymi kopiami za pomocą wektora binarnego BIBAC-GW. J. Vis. Exp. (2018).

W tym filmie demonstrujemy generację transgenicznych roślin Arabidopsis wykazujących ekspresję stabilnego transgenu poprzez transformację binarnego sztucznego genu bakteryjnego opartego na chromosomach za pośrednictwem Agrobacterium.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Arabidopsis Przekształcenie

  1. Przygotuj rośliny Arabidopsis do transformacji.
    1. Uprawiaj rzodkiewnik w szklarni lub komorze wzrostu z kontrolowanym klimatem, aż zakwitną (12 doniczek po 9 roślin każda).
    2. Przypnij pierwsze, aby umożliwić pojawienie się większej liczby dodatkowych. Rośliny są gotowe do zanurzania 4–6 dni po ścięciu, kiedy rośliny mają wiele niedojrzałych główek kwiatowych i niewiele nawożonych krzemionek.
  2. Zanurzanie kwiatów
    1. Zanurz kwiatostany na 5–10 s w zawiesinie Agrobacterium przenoszącej T-DNA sklonowane za pomocą binarnego sztu....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
Rycina 1: Taca wypełniona siewkami rzodkiewnika przed i po zabiegu glufosynatem amonowym. Siewki bez ekspresji genu bar, który jest obecny w t-DNA pBIBAC-BAR-GW T-DNA giną po spryskaniu roztworem glufosynatu amonowego. Zdjęcia pokazują tę samą tacę z sadzonkami (A) przed opryskiem glufosynatem amonowym, 14 dni po siewie i (B) 10 dni później, po dwukrotnym spryskaniu.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Nie stwierdzono konfliktu interesów.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Siarczan kanamycyny jednowodnyDuchefa powiedział:Zobacz materiał K0126
Brama mieszaniny enzymów klonazy LR Thermo Scientific - InvitrogenNumer katalogowy 11791-019
Murashige Skoog średniDuchefa powiedział:Zobacz materiał M0221
agarBdNumer katalogowy 214010
Glufosynat amonowy (Basta)Bayer79391781
Imager fosforowyGE Healthcare Nauki przyrodniczeTajfun FLA 7000
folia spożywcza (okład Saran)Omnilabo (Omnilabo)1090681
AgarozyThermo Scientific - Invitrogen16500
TGL szt.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Binary Bacterial Artificial ChromosomeAgrobacterium mediated TransformationArabidopsis PlantsSingle copy InsertionFloral Dipping TechniqueFluorescence MicroscopyHerbicide Resistance ScreeningGenomic DNA ExtractionPCR AnalysisSeed specific Promoter

Related Articles