Techniki edycji genomu

Ten film wyjaśnia koncepcję edytorów zasad cytozynowych za pośrednictwem CRISPR do indukowania celowanej substytucji nukleotydów.

W tym filmie demonstrujemy edycję genomu opartą na CRISPR-Cas9 w hodowanych komórkach, gdzie Cas9 i sgRNA są dostarczane jako pojedynczy konstrukt plazmidowy do komórek. System CRISPR-Cas9 i pożądany gen, który ma zostać wstawiony, został wprowadzony do komórek za pomocą techniki elektroporacji, aby ułatwić pomyślną edycję genów.

Ten film demonstruje technikę edycji genomu w ludzkich pluripotencjalnych komórkach macierzystych (hPSC) za pomocą nukleazy palca cynkowego. Ponieważ hPSC mogą być potencjalnie różnicowane w różne typy komórek, technologia ta jest pomocna w badaniach patologicznych i farmakologicznych in vitro w sposób specyficzny dla pacjenta.

Ten film opisuje precyzyjną technikę edycji genomu w ludzkich indukowanych pluripotencjalnych komórkach macierzystych (hiPSC), wykorzystującą TALENy do tworzenia dwuniciowych pęknięć w docelowym locus, indukując ukierunkowaną homologię naprawę integracji genów białka fluorescencji.

W tym filmie demonstrujemy integrację transgenu w zarodku Anopheles za pośrednictwem phiC31 za pośrednictwem mikroiniekcji. Metoda ta pomaga wprowadzić pożądane geny do systemu gospodarza do zastosowań badawczych i przemysłowych.

W tym filmie demonstrujemy generację transgenicznych roślin Arabidopsis wykazujących ekspresję stabilnego transgenu poprzez transformację binarnego sztucznego genu bakteryjnego opartego na chromosomach za pośrednictwem Agrobacterium.

W tym filmie demonstrujemy procedurę generowania stabilnej transgenicznej linii danio pręgowanej, konstytutywnie wyrażającej fluorescencyjne białko wskaźnika napięcia po jednoczesnym wstrzyknięciu systemu transpozonów Tol2 składającego się z mRNA transpozazy i konstruktu transpozonu Tol2 kodującego wskaźnik napięcia fluorescencyjnego.

Ten film demonstruje procedurę generowania neuronów ruchowych poprzez transfekcję ludzkich iPSC za pomocą systemu transpozonów PiggyBac poprzez ektopową ekspresję czynników transkrypcyjnych specyficznych dla linii.

Ten film demonstruje wyciszanie genów w patogennym Leptospira za pomocą interferencji CRISPR. Ukierunkowana represja ekspresji genów za pomocą systemu CRISPR/Cas, który blokuje tworzenie mRNA, pomaga zidentyfikować geny kandydujące do badań patologicznych i farmakologicznych.

Ten film opisuje procedurę nokautu genu docelowego za pomocą systemu rekombinazy Cre indukowanego tamoksyfenem po dootrzewnowym wstrzyknięciu tamoksyfenu w modelu mysim.

Ten film opisuje technikę nokautu genów za pomocą konkategomera CRISPR do jednoczesnego eliminowania wielu genów w hodowanych komórkach organoidów jelitowych myszy. Metoda ta służy do wyeliminowania chorego genu i wyjaśnienia funkcji genu i jego paralogów.

W tym filmie demonstrujemy metodę przeprowadzania transdukcji wektorów lentiwirusowych shRNA w celu uzyskania stabilnych linii komórkowych knockdown w unieśmiertelnionych hematopoetycznych komórkach macierzystych i progenitorowych (iHSPC).

Ten film demonstruje system ekspresji genów tetracykliny lub Tet-On w modelu mysim. W obecności doksycykliny, pochodnej tetracykliny, system Tet-On składający się z białka transaktywatora kontrolowanego przez odwróconą tetracyklinę ulega aktywacji i ulega ekspresji interesującego genu.

W tym filmie opisujemy procedurę odwrotnej transfekcji siRNA do adipocytów w celu modulacji ekspresji docelowego białka.

Ten film opisuje metodę regulacji ekspresji genów w hodowanych komórkach poprzez transfekcję plazmidem zawierającym interesujący nas gen i plazmid regulatorowy. Ekspresja tego plazmidu może być kontrolowana przez tetracyklinę lub jej syntetyczne analogi, co czyni ten system użytecznym modelem do badania regulowanej ekspresji genów.

Ten film opisuje technikę nokautowania genów za pomocą mikroiniekcji blokujących translację morfolinosów w stadium jednokomórkowym ryby jaskiniowej. Morfolinos to oligonukleotydy DNA, które wiążą się z komplementarną sekwencją docelowego mRNA i blokują jej translację do białka. W związku z tym morfoliny są używane jako narzędzia molekularne do przejściowego zatrzymywania lub zmniejszania ekspresji genu.