1. Leczenie noworodków myszy rAAV9 w P0.5-P2.5 przez wstrzyknięcie podskórne.
<ol>
	<li>Wstępnie napełnij strzykawkę insulinową 29G1/2 0,33 x 12,7 mm roztworem rekombinowanego wirusa związanego z adenowirusem 9 (rAAV9). Uważaj, aby usunąć pęcherzyki powietrza.</li>
	<li>Trzymaj znieczulone kriogenicznie szczenię w jednej ręce kciukiem i palcem wskazującym. Przed wstrzyknięciem należy przetrzeć tylną skórę szczeniaka patyczkiem nasączonym 70% alkoholem izopropylowym, aby utrzymać sterylny stan. Wprowadzić igłę strzykawki w przednią i grzbietową tkankę podskórną zwierzęcia pod kątem od 5 do 10°. Wstrzyknąć 50-70 μl roztworu rAAV9 za pomocą strzykawki insulinowej. 
	UWAGA: rAAV9 może być również podawany myszy w postaci wstrzyknięcia dootrzewnowego lub dożylnego. Można uzyskać efektywną ekspresję dostarczonych genów w sercu. Jednak wstrzyknięcie dootrzewnowe czasami może spowodować nieszczelne wymioty w wątrobie. Po wstrzyknięciu stan szczeniąt był codziennie monitorowany.</li>
</ol>

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Grafika wektorowa rAAV9 </td>
			<td>Rdzeń wektorowy Penna </td>
			<td>Zobacz materiał P1967</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dostarczanie genów na podstawie rekombinowanego wirusa związanego z adenowirusem: technika dostarczania transgenu i ekspresji specyficznej dla serca w modelu gryzoni

Recombinant Adeno Associated Virus Based Gene Delivery: A Technique for Transgene Delivery and Cardiac-Specific Expression in Rodent Model

Źródło: Ding, J. et al. <a href="https://www.jove.com/v/54787">Przygotowanie rAAV9 do nadekspresji lub knockdownu genów w sercach myszy.</a> J. Vis. Exp. (2016)
W tym filmie pokazujemy dostarczanie rekombinowanego genu związanego z adeno na bazie wirusa u szczeniaka myszy. Metoda ta pomaga w badaniu ekspresji genów w docelowych komórkach.

Dostarczanie genów na podstawie rekombinowanego wirusa związanego z adenowirusem: technika dostarczania transgenu i ekspresji specyficznej dla serca w modelu gryzoni

Źródło: Ding, J. i wsp. Przygotowanie rAAV9 do nadekspresji lub knockdown genów w sercach myszy. J. Vis. Exp. (2016)
W tym filmie pokazujemy ...

Rekombinowany wirus związany z adenowirusem, rAAV, jest małym, jednoniciowym wirusem DNA genetycznie zmodyfikowanym w celu celowania w określony typ komórki i transportu jego ładunku genetycznego do jądra komórki gospodarza w celu ekspresji genów.
Zacznij od unieruchomienia znieczulonego kriogenicznie szczeniaka myszy. Wysterylizuj skórę pleców i wstrzyknij podskórnie wektor rAAV przenoszący pożądany transgen wzdłuż promotora specyficznego dla serca. Wektor zostaje wchłonięty przez układ naczyniowy i dociera do odległych narządów, w tym do serca.
W tym przypadku rekombinowany wirus przyczepia się do powierzchni kardiomiocytu i zostaje zinternalizowany przez endocytozę do endosomu. W endosomie kapsyd wirusa częściowo się rozkłada, odsłaniając białka lityczne wirusa. Białko to indukuje pory w błonie endosomalnej, przez które wektor ucieka do cytoplazmy.
Wektor przemieszcza się przez mikrotubule cytoplazmatyczne i wchodzi przez pory jądrowe. Po dostaniu się do jądra kapsyd wirusa rozkłada się, aby uwolnić swój genom. Jednoniciowy DNA przenoszący gen docelowy jest następnie przekształcany w dwuniciowy DNA.
Po transkrypcji DNA wytworzone mRNA przemieszcza się do cytoplazmy. Tutaj mRNA ulega translacji, wyrażając docelowe białko w kardiomiocytach. Obserwuj próbki tkanek z różnych narządów pod mikroskopem fluorescencyjnym, aby określić skuteczność i specyficzność tkankową dostarczania genu do serca.

Po ustaleniu miana wirusa zgodnie z protokołem tekstowym należy przygotować roztwory robocze rAAV9 z mianem wirusa 1-7 x 1012 cząstek na mililitr. Aby leczyć nowonarodzone myszy, użyj roztworu rAAV9, aby wstępnie napełnić strzykawkę insulinową o wymiarach 0,33 x 12,7 mililitra igłą o rozmiarze 29 x 1/2 cala, unikając pęcherzyków powietrza.
Po krioznieczuleniu szczeniaka trzymaj szczeniaka w jednej ręce kciukiem i palcem wskazującym. Następnie przetrzyj tylną skórę szczeniaka patyczkiem do wacików nasączonym 70% alkoholem izopropylowym. Wprowadzić igłę strzykawki do przedniego grzbietowo-grzbietowego tkanki podskórnej zwierzęcia pod kątem od 5 do 10 stopni przed wstrzyknięciem od 50 do 70 mikrolitrów roztworu rAAV9.

recombinant-adeno-associated-virus-based-gene-delivery-technique-for

Research

JoVE Encyclopedia of Experiments

Biological Techniques

Techniki biologiczne

Gene Transfer Techniques

Techniki transferu genów

Transduction

Transdukcja

2.9K Views. Rekombinowany wirus związany z adenowirusem, rAAV, jest małym, jednoniciowym wirusem DNA genetycznie zmodyfikowanym w celu celowania w określony typ komórki i transportu jego ładunku genetycznego do jądra komórki gospodarza w celu ekspresji genów. Zacznij od unieruchomienia znieczulonego kriogenicznie szczeniaka myszy. Wysterylizuj skórę pleców i wstrzyknij podskórnie wektor rAAV przenoszący pożądany transgen wzdłuż promotora specyficznego dla serca. Wektor zostaje wch...

Dostarczanie genów na podstawie rekombinowanego wirusa związanego z adenowirusem: technika dostarczania transgenu i ekspresji specyficznej dla serca w modelu gryzoni

W tym artykule

Streszczenie

Protokół

Oświadczenia

Materiały

Przedruki i uprawnienia

Tagi

Powiązane artykuły