Barwienie Safraniną-O: metoda wizualizacji integralności strukturalnej i komórkowości chrząstki

Streszczenie

Źródło: Zhao, Y., et al. Ustanowienie chirurgicznie indukowanego modelu u myszy w celu zbadania ochronnej roli progranuliny w chorobie zwyrodnieniowej stawów. J. Vis. Exp. (2014).

W tym filmie demonstrujemy procedurę barwienia chrząstki za pomocą safraniny-pomarańczy. Ta metoda pomaga uwidocznić chrząstkę i wykryć wszelkie uszkodzenia.

Protokół

1. Safranina O, barwienie

1. Zacznij od szklanych szkiełek zawierających seryjne przekroje strzałkowe obejmujące obszar od środka kłykcia bocznego do środka kłykcia przyśrodkowego modelu myszy poddanego eutanazji ze zdestabilizowaną łąkotką przyśrodkową.
2. Następnie odparafinować szkiełka w oksylenie i uwodnić je w gradiencie etanolu do wody destylowanej. Następnie szkiełka są barwione w roztworze żelaza hematoksyliny Weigerta, 0,05% roztworze Fast Green (FCF), 1% roztworze kwasu octowego i 0,1% roztworze Safraniny O. Zamontuj szkiełka za pomocą podłoża żywicznego.
3. Oceń szkiełka barwione Safraninem O na podstawie utraty proteoglikanu (czerwony kolor) w chrząstce i procentowego zniszczenia struktury chrząstki, wykonaj analizę statystyczną dla wyniku histologicznego.