Artykuł metodologiczny

Metoda podwójnego barwienia: technika wizualizacji interakcji roślina-grzyb przy użyciu czerwieni rutenowej i laktofenolu cotton blue

8 lipca 2025

W tym artykule

Streszczenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Źródło: Marques, J. P. R., and Nuevo, L. G. Metoda podwójnego barwienia do wykrywania pektyny w interakcji roślina-grzyb. J. Vis. Exp. (2022).

Ten film demonstruje metodę podwójnego barwienia przy użyciu czerwieni rutenowej i błękitu bawełnianego laktofenolu do wizualizacji pektyn i chityny podczas interakcji roślina-grzyb w roślinie rdzy kawowej. Zabieg pomaga zrozumieć mechanizmy obronne roślin podczas infekcji grzybiczych.

Protokół

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Proces podwójnego barwienia

  1. Zacznij od ultracienkich, zatopionych w żywicy odcinków liści Coffee arabica odmiany Catuaí zakażonych rdzą kawową. Przykryj sekcje 2 ml 5% błękitu bawełnianego z laktofenolem (40% glicerolu, 20% fenolu i 20% kwasu mlekowego w wodzie) i podgrzewaj je na gorącej płycie w temperaturze 45 °C przez 5 minut (Rysunek 1A).
  2. Usuń nadmiar barwnika, myjąc szkiełko trzykrotnie w zlewce wypełnionej wodą destylowaną (Rysunek 1B-D).
  3. Zabarwić 2 ml 0,01% czerwieni rutenowej w wodzie przez 1 minutę (ryc. 1E).
  4. Usunąć nadmiar barwnika, myjąc szkiełko trzykrotnie w zlewce wypełnionej wodą destylowaną (Rysunek 1F,G).
  5. Umieść kroplę wody destylowanej na skrawki i przykryj je szkiełkiem nakrywkowym o wymiarach 24 mm x 60 mm w celu przeprowadzenia analizy mikroskopowej w świetle.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
Rysunek 1: Szczegółowe informacje na temat poszczególnych etapów protokołu podwójnego barwienia. (A) Przykryj skrawki kroplami laktofenolu w kolorze niebieskim i podgrzej szkiełka na gorącej płycie w temperaturze 45 °C. (B-C) Usuń nadmiar barwnika, myjąc go w wodzie destylowanej. (D) Sekcje na szkiełkach po umyciu (oznaczone strzałkami). (E) Przykryj skrawki kropla...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Nie stwierdzono konfliktu interesów.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Płyta grzejnaDubesser powiedział:SSCD25X30-110VBarwienia
Bawełniany niebieski laktofenolMetaquímica70SOLSIG024629Barwienia
mikroskopiaZeiss#490040-0030-000Przechwytywanie obrazu
Plastikowa taca na kubki do formowaniaEmsNumer katalogowy: 10176-30Barwienia
Ruten czerwonyLABHouse#006004Barwienia
Oprogramowanie Axion VisionZeiss#410130-0909-000Przechwytywanie obrazu
powiedział:

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

Interakcja ro liny z grzybembarwienie czerwieni rutenowwizualizacja pektynwykrywanie chitynyrdza kawyenkapsulacja haustori wanaliza mikroskopowabarwienie histologiczne

Powiązane artykuły