Metoda podwójnego barwienia: technika wizualizacji interakcji roślina-grzyb przy użyciu czerwieni rutenowej i laktofenolu cotton blue

Streszczenie

Źródło: Marques, J. P. R., and Nuevo, L. G. Metoda podwójnego barwienia do wykrywania pektyny w interakcji roślina-grzyb. J. Vis. Exp. (2022).

Ten film demonstruje metodę podwójnego barwienia przy użyciu czerwieni rutenowej i błękitu bawełnianego laktofenolu do wizualizacji pektyn i chityny podczas interakcji roślina-grzyb w roślinie rdzy kawowej. Zabieg pomaga zrozumieć mechanizmy obronne roślin podczas infekcji grzybiczych.

Protokół

1. Proces podwójnego barwienia

1. Zacznij od ultracienkich, zatopionych w żywicy odcinków liści Coffee arabica odmiany Catuaí zakażonych rdzą kawową. Przykryj sekcje 2 ml 5% błękitu bawełnianego z laktofenolem (40% glicerolu, 20% fenolu i 20% kwasu mlekowego w wodzie) i podgrzewaj je na gorącej płycie w temperaturze 45 °C przez 5 minut (Rysunek 1A).
2. Usuń nadmiar barwnika, myjąc szkiełko trzykrotnie w zlewce wypełnionej wodą destylowaną (Rysunek 1B-D).
3. Zabarwić 2 ml 0,01% czerwieni rutenowej w wodzie przez 1 minutę (ryc. 1E).
4. Usunąć nadmiar barwnika, myjąc szkiełko trzykrotnie w zlewce wypełnionej wodą destylowaną (Rysunek 1F,G).
5. Umieść kroplę wody destylowanej na skrawki i przykryj je szkiełkiem nakrywkowym o wymiarach 24 mm x 60 mm w celu przeprowadzenia analizy mikroskopowej w świetle.

Wyniki

Rysunek 1: Szczegółowe informacje na temat poszczególnych etapów protokołu podwójnego barwienia. (A) Przykryj skrawki kroplami laktofenolu w kolorze niebieskim i podgrzej szkiełka na gorącej płycie w temperaturze 45 °C. (B-C) Usuń nadmiar barwnika, myjąc go w wodzie destylowanej. (D) Sekcje na szkiełkach po umyciu (oznaczone strzałkami). (E) Przykryj skrawki kropla...

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Płyta grzejna	Dubesser powiedział:	SSCD25X30-110V	Barwienia
Bawełniany niebieski laktofenol	Metaquímica	70SOLSIG024629	Barwienia
mikroskopia	Zeiss	#490040-0030-000	Przechwytywanie obrazu
Plastikowa taca na kubki do formowania	Ems	Numer katalogowy: 10176-30	Barwienia
Ruten czerwony	LABHouse	#006004	Barwienia
Oprogramowanie Axion Vision	Zeiss	#410130-0909-000	Przechwytywanie obrazu

powiedział: