Barwienie Sudan IV: procedura barwienia blaszek miażdżycowych obciążonych lipidami w pobranym łuku aorty myszy

Abstract

Źródło: Centa, M., et al. Kwantyfikacja miażdżycy u myszy. J. Vis. Exp. (2019 rok)

Ten film demonstruje procedurę z użyciem barwnika Sudan IV do barwienia złogów tłuszczu w pobranym łuku aorty myszy w celu wizualizacji blaszek miażdżycowych i określenia zakresu miażdżycy.

Protocol

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny komitet ds. opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE

1. Analiza en face łuku aorty i tętnicy ramienno-głowowej

1. Przygotuj łoża pinowe do analizy en face łuków aorty. Złóż segment folii parafinowej osiem razy, aby uzyskać płaską powierzchnię o wymiarach 25 mm x 25 mm. Owiń go czarną taśmą izolacyjną, aby stworzyć ciemne tło dla aorty. Umieść etykietę z tyłu łoża do przypinania i użyj ołówka, aby napisać numer identyfikacyjny myszy (normalny atrament w długopisie zniknie w procesie barwienia).
2. Przenie....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
taśma elektroizolacyjna (szerokość 50 mm)	Każdy wyspecjalizowany sprzedawca		Do tworzenia łożysk przypinających dla łuków aorty.
Nożyczki preparacyjne (10 cm, proste)	Światowe instrumenty precyzyjne	Numer katalogowy: 14393	Do ogólnego rozwarstwiania narządów.
Kleszcze Dumont #5 (11 cm, proste)	Światowe instrumenty precyzyjne	500341	Do mikrodysekcji aorty.
Etanol 70% (v/v)	Firma VWR Chemicals	Numer katalogowy: 83801.29	Wysoce łatwopalną ciecz i parę, przechowywać w dobrze wentylowanym miejscu i przechowywać w chłodnym miejscu.
Absolutny etanol ≥99,8%	Firma VWR Chemicals	20821.31	Wysoce łatwopalną ciecz i parę, przechowywać w dobrze wentylowanym miejscu i przechowywać w chłodnym miejscu.
Formaldehyd 4% stabilizowany, buforowany (pH 7,0)	Firma VWR Chemicals	9713.1	Działa szkodliwie przez drogi oddechowe, w kontakcie ze skórą i po połknięciu.
Izopropanol	Merck	1096341011	Łatwopalna ciecz, powoduje poważne podrażnienie oczu i może powodować senność lub zawroty głowy.
Uchwyt na igły Micro Castroviejo (9 cm, prosty)	Światowe instrumenty precyzyjne	503376	Do przypinania łuków aorty.
Szpilki do owadów Minutien, 0,10 mm	Narzędzia naukowe	26002-10	Do przypinania łuków aorty.
Parafilm M	Bemis	Zobacz materiał PM992	Film parafinowy używany do tworzenia łożysk pinowych dla łuków aorty.
Solanka fizjologiczna buforowana fosforanami (PBS)	-	-	Do perfuzji myszy wymagany jest sterylny i wolny od RNaz roztwór
Mikroskop stereoskopowy	Mikrosystemy Leica	MZ6	Do sekcji zwłok i dokumentacji en face
Sudan IV	Sigma-Aldrich	Zobacz materiał S4261	Nie sklasyfikowana jako substancja lub mieszanina stwarzająca zagrożenie.
Nożyczki Vannas (8 cm, proste)	Światowe instrumenty precyzyjne	503378	Do mikrodysekcji aorty.