Artykuł metodologiczny

Spektroskopia fluktuacji fluorescencji w celu zbadania interakcji białek w kontaktach komórkowych

8 lipca 2025

W tym artykule

Streszczenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Źródło: Dunsing, V. et al. A Spektroskopia fluscencji fluorescencji interakcji białko-białko na styku komórka-komórka. J. Vis. Exp. (2018).

Ten film demonstruje użycie spektroskopii fluktuacji fluorescencji do wykrywania interakcji między białkami na powierzchni komórki na styku komórka-komórka. Poprzez ekspresję transbłonowego receptora adhezyjnego będącego przedmiotem zainteresowania znakowanego białkiem fluorescencyjnym i mieszanie dwóch różnych populacji komórek zawierających dwie spektralnie oddzielone znaczniki fluorescencyjne, trans-interakcja między receptorami dwóch sąsiednich komórek o różnej fluorescencji jest oceniana poprzez korelację krzyżową w wahaniach intensywności fluorescencji.

Protokół

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Przygotowanie próbki: Test mieszania komórek z komórkami

UWAGA: Poniższy protokół opisuje procedurę mieszania dla przylegających komórek. Może być on modyfikowany dla komórek hodowanych w zawiesinie.

  1. Wysiewać odpowiednią liczbę komórek na płytce 6-dołkowej, np. 800 000 komórek HEK 293T (policzonych za pomocą komory liczącej Neubauera), dzień przed transfekcją. Liczba ta może być modyfikowana w zależności od czasu między wysiewem a transfekcją i dostosowywana do innych typów komórek. Aby przeprowadzić podstawowy eksperyment (tj. białka będące przedmiotem zainteresowania i kontrola negatywna),....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
Rysunek 1. Eksperymentalny przebieg pracy i schematyczne przedstawienie spektroskopii korelacji krzyżowej fluorescencji skaningowej oraz analizy liczby i jasności korelacji krzyżowej na styku komórka-komórka. (A) Schemat przygotowania próbki: Dwie populacje komórek transfekowane białkiem będącym przedmiotem zainteresowania (np. APLP1) połączone z dwoma spektralnie odrębnymi białkami.......

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Nie stwierdzono konfliktu interesów.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Pożywka wzrostowa DMEMPAN-BiotechnologiaP04-01548
DPBS bez: Ca2+ i Mg2+PAN-BiotechnologiaZobacz materiał P04-36500
DPBS w: Ca2+ i Mg2+PAN-BiotechnologiaZobacz materiał P04-35500
Trypsyna EDTAPAN-BiotechnologiaP10-023100
Odczynnik do transfekcji TurboFectThermo Fisher NaukowyCzynnik R0531
Ogniwa HEK 293TKomunikacja DSMZZobacz materiał ACC 635
Alexa Fluor 488 NHS EsterThermo Fisher NaukowyA20000
Rodamina BSigma-AldrichNumer katalogowy 83689-1G
Plazmidowe DNAAddgene powiedział:nieZobacz Dunsing et al., MBoC 2017, aby uzyskać szczegółowy opis wszystkich plazmidów
Płytka 6-dołkowaStarlab (Laboratorium Starlab)CC7672-7506
Naczynia ze szklanym dnem o średnicy 35 mmKomórka VisD35-14-1.5-N
Konfokalny Zeiss LSM780Carl Zeissnie
Komora zliczania komórek NeubaueraLotnisko MarienfeldNumer katalogowy: 640110
TGL powiedział:

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

Oddzia ywania bia ko bia kokontakty mi dzykom rkowemikroskopia konfokalnafluktuacje intensywno ci fluorescencjianaliza korelacji wzajemnejznakowanie bia ek fluorescencyjnymitransmembrane receptory adhezyjneakwizycja skanowania liniowegotryb zliczania foton w

Powiązane artykuły