Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
1.8K wyświetleń
⸱
8 lipca 2025
Źródło: Maier, I. Inżynieria środków przeciwwirusowych za pomocą powierzchniowego rezonansu plazmonowego. J. Vis. Exp. (2022)
Ten film opisuje technikę powierzchniowego rezonansu plazmonowego, czyli SPR, do badania interakcji między dwiema cząsteczkami za pomocą chipa czujnika. Zmiana kąta rezonansu i natężenie odbitego światła są wykrywane jako funkcja asocjacji i dysocjacji dwóch cząsteczek, a to dostarcza informacji o oddziaływaniach między dwiema cząsteczkami.
Na potrzeby niniejszego badania, w testach immunoenzymatycznych zamiast CV-N zastosowano białko fuzyjne CVN-małego modyfikatora ubikwityny (SUMO) i jest ono odpowiednie do testów komórkowych. Rekombinowane białko HA H3 wirusa grypy A o pełnej długości jest otrzymywane w handlu (patrz tabela materiałów) lub ulega ekspresji w liniach komórkowych HEK293 ssaków i komórkach owadów zakażonych bakulowirusem zgodnie ze standardowymi protokołami. Białko kolca Wuhan-1 ulega ekspresji w komórkach HEK293 ssaków. Synteza peptydu mon-mannozylowanego (MM) i peptydu di-mannozylowanego (DM) pozwala na wykrycie jednorodnych ligandów do CVN2 i monomannozylowanych małych....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Rysunek 1: Sekwencje i ekspresja CV-N. (A) CVN2 bez łącznika między każdym powtórzeniem CV-N (po 101 aminokwasów) i czterema mostkami dwusiarczkowymi ulega ekspresji w wektorze pET11a w E. coli. (B) Ekspresja dwóch niezależnych kolonii dla CV-N (monomer) i CVN2 (dimer). (C) Warianty wiązań dwusiarczkowych są oczyszczane i analizowa.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Äkta primeplus | Cytiva (Cytiwa) | ||
| Rurki Amicon | Merck | Zobacz materiał C7715 | |
| Ampillicyna | Sigma-Aldrich | Nr kat. A5354 | |
| Wirówka Beckmann Coulter Cooler Allegra X-30R | Beckman Coulter | Zobacz materiał B06320 | |
| Rozsiewacz komórek | Sigma-Aldrich | HS86655 | Stal nierdzewna srebrna, pręt L 33 mm |
| Niestandardowe oligonukleotydy DNA | Sigma-Aldrich | OLIGO (OLIGO) | |
| Niestandardowa synteza genów | Język GenScript | #1390661 | Wektor klonowania: pET27b(+) |
| Cytiva HBS-EP+ Bufor 10, 4x50mL | Thermo Scientific | Numer katalogowy: 50-105-5354 | |
| Dionex UlitMate 3000 | Thermo Scientific | IQLAAAGABHFAPBMBFB powiedział: | |
| Enzym restrykcyjny Dpn I (10 U/μL) | Fisher Naukowy | Zobacz materiał ER1701 | |
| Naziemna telewizja | Merck | Naziemna Telewizja Cyfrowo-Rozwojowa (DTT-RO | |
| Edc | Merck | Numer katalogowy: 39391 | |
| Edta | Merck | Numer katalogowy E9884 | |
| Dętki Eppendorf Safe-Lock | Eppendorf | 30120086 | |
| Dętki Eppendorf Safe-Lock | Eppendorf | 30120094 | |
| Mikrowirówka osobista Eppendorf Minispin i MiniSpin Plus | Sigma-Aldrich | Z606235 | |
| etanol | Merck | Numer katalogowy: 51976 | |
| Etanoloamina HCl | Merck | E6133 | |
| Stożkowe probówki wirówkowe Falcon 50 ml | Fisher Naukowy | Numer katalogowy: 14-432-22 | |
| Falcon 14 ml probówka z polistyrenu z okrągłym dnem, z zakrętką, sterylna, 25 sztuk w opakowaniu | Corning | 352057 | |
| glukoza | Merck | Kontroler G8270 | |
| Glicyna HCl | Merck | Numer katalogowy: 55097 | |
| Białko HA H3 | Księga Abcam | ab69751 | |
| HEPESY | Merck | H3375 | |
| Jego wybór Ni2+ | Merck | H0537 | |
| Imidazol | Merck | I2399 | |
| Protokół IPTG | Merck | I6758 | |
| Kanamycyna A | Sigma-Aldrich | Zobacz materiał K1377 | |
| Kromasil 300-5-C4 | Nouryon powiedział: | ||
| Agar LB | Merck | Numer katalogowy: 52062 | |
| Agar LB | Merck | Rocznik 19344 | |
| LB Lennox | Merck | L3022 | |
| Lizozymu | Merck | 10837059001 | |
| Chlorek magnezu | Merck | Zobacz materiał M8266 | |
| Siarczan magnezu | Merck | Zobacz materiał M7506 | |
| NaH2P04 | Merck | S0751 | |
| Spektrofotometr NanoDrop UV-Vis2000c | Thermo Scientific | ND2000CLAPTOP | |
| NaOH | Merck | Zobacz materiał S5881 | |
| Nhs | Merck | 130672 | |
| Amina nowozelandzka (hydrolizat kazeiny) | Merck | Zobacz materiał C0626 | |
| Pbs | Merck | 806552 | |
| PD MidiTrap G-10 | Sigma-Aldrich | Przekaźnik GE28-9180-11 | |
| Pepton | Merck | Numer katalogowy: 70171 | |
| pET11a powiedział: | Merck Millipore (Novagen) | Numer katalogowy: 69436 | |
| PMSF (Kanał PMSF) | Merck | PMSF-RO | |
| Zestaw QIAprep Spin Miniprep (1000) | Qiagen powiedział: | Zobacz materiał 27106X4 | |
| Pakiet oprogramowania Reichert Autolink1-1-9 | Reichert | ||
| System dwukanałowy Reichert SPR SR7500DC | Reichert | ||
| Scrubber2-2012-09-04 do analizy danych | Reichert | ||
| Sds | Merck | 11667289001 | |
| Zestaw do mutagenezy ukierunkowanej na miejsce, w tym plazmid kontrolny pUC18 | Podstęp | #200518 | |
| Chlorek sodu | Merck | Numer katalogowy S9888 | |
| Octan sodu trójwodny | Merck | Numer katalogowy: 236500 | |
| Układ czujnika SPR C19RBDHC30M | Analityka biologiczna XanTec | SCR C19RBDHC30M | |
| Układ czujnika SPR CMD500D | Analityka biologiczna XanTec | SCR CMD500D | |
| Szalki Petriego Sterilin Standard 90 mm | Thermo Scientific | Zobacz materiał 101R20 | |
| Tbs | Merck | Zobacz materiał T5912 | 10x, roztwór |
| Tryton-X100 | Merck | Zobacz materiał T8787 | |
| Trypton | Merck | Numer katalogowy: 93657 | |
| Kanał Tween20 | Merck | Zobacz materiał P1379 | |
| Mikser Vortex-Genie 2 | Merck | Z258423 | |
| Procesor X-gal | Merck | XGAL-RO (wersja odwrócona) | |
| XL1-Niebieskie superkompetentne ogniwa | Podstęp | #200236 | |
| Ekstrakt drożdżowy | Merck | Y1625 |
