Test reporterowy oparty na teście ELISA do badania interakcji receptor-ligand w komórkach BW

W tym artykule

Streszczenie

Źródło: Elias, S. et al., A BW Reporter System do badania interakcji receptor-ligand. J. Vis. Exp. (2019)

Ten film demonstruje wykrywanie interakcji receptor-ligand za pomocą testu reporterowego. Udana interakcja receptor-ligand aktywuje dalszy szlak sygnałowy, powodując wytwarzanie i uwalnianie cytokin jako wydzielniczych cząsteczek reporterowych w roztworze, co potwierdza się za pomocą testu ELISA.

Protokół

1. Generowanie plazmidu, który wyraża konstrukt chimeryczny

UWAGA: Celem jest wygenerowanie plazmidu, który wyraża zewnątrzkomórkową domenę interesującego nas receptora, połączoną z domenami transbłonowymi i wewnątrzkomórkowymi mysiego łańcucha CD3ζ (Rysunek 1A).

Pobierz sekwencję domeny zewnątrzkomórkowej receptora będącego przedmiotem zainteresowania, w tym peptydu sygnałowego. Uzyskaj materiał DNA, który ma wyrażać ten receptor (np. cDNA lub plazmid).
Uzyskaj materiał DNA, który wyraża domeny transbłonowe i wewnątrzkomórkowe mysiego łańcucha CD3ζ (np

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

figure-results-1
Rycina 1: Struktura receptora chimerycznego-CD3ζ i konstrukcja starterów PCR. (A) Ogólna struktura receptora zewnątrzkomórkowego połączonego z domenami transbłonowymi i wewnątrzkomórkowymi mysiego CD3ζ. (B) Domena zewnątrzkomórkowa receptora została amplifikowana starterem 3', który zawierał również nukleotydy CD3ζ. (C) Wewnątrzkomórkowe i transbłonowe domeny CD3ζ amplifikowano starterem 5', który z.......