Izolacja komórek jednojądrzastych krwi obwodowej z ludzkich płaszczy kożucha

Streszczenie

Źródło: Mily, A., et al. Polaryzacja ludzkich komórek pochodzących z monocytów M1 i M2 oraz analiza za pomocą cytometrii przepływowej po zakażeniu Mycobacterium tuberculosis. J. Vis. Exp. (2020)

W tym filmie pokazujemy izolację komórek jednojądrzastych krwi obwodowej, PBMC, zawierających monocyty i limfocyty z ludzkiej kożuchy przez wirowanie w gradicynacji gęstości. Wyizolowane PBMC można wykorzystać do dalszej analizy.

Protokół

Wszystkie procedury z udziałem ludzi zostały przeprowadzone zgodnie z instytucjonalnymi, krajowymi i międzynarodowymi wytycznymi dotyczącymi dobrobytu ludzi i zostały sprawdzone przez lokalną komisję rewizyjną instytucji.

1. Przygotowanie mediów

UWAGA: Szczegóły dotyczące wszystkich odczynników i materiałów eksploatacyjnych znajdują się w Tabeli Materiałów.

1. Kompletna pożywka RPMI: Uzupełnij RPMI 1640 o 1 mM pirogronianu sodu, 2 mM L-glutaminy, 10 mM HEPES i 10% inaktywowanej termicznie płodowej surowicy bydlęcej (FBS). Unikaj antybiotyków w pożywce do....

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Preparat limfatyczny	Alere Technologies AS	11508545
Silnik RPMI 1640	Korporacja Technologii Życiowych	SH30096.01
EDTA (0,5 mln)	Szpital Uniwersytecki Karolinska, Huddinge	N/a
Na-pirogronian	GE Healthcare Nauki przyrodnicze	SH300239.01
L-glutamina	GE Healthcare Nauki przyrodnicze	SH30034.01
HEPESY	GE Healthcare Nauki przyrodnicze	SH30237.01
Surowica płodowa bydlęca (FBS)	Sigma-Aldrich	F7524

powiedział: