Różnicowanie i polaryzacja komórek pochodzących z monocytów w komórki podobne do makrofagów

Streszczenie

Źródło: Mily, A., et al. Polaryzacja komórek pochodzących z ludzkich monocytów M1 i M2 oraz analiza za pomocą cytometrii przepływowej po zakażeniu Mycobacterium tuberculosis. J. Vis. Exp. (2020).

W tym filmie demonstrujemy procedurę indukowania różnicowania i polaryzacji monocytów pochodzących z krwi obwodowej na makrofagi M1 lub M2. Inkubacja z czynnikiem stymulującym tworzenie kolonii granulocytów-makrofagów, lipopolisacharydem i interferonem-gamma daje prozapalne makrofagi M1, podczas gdy inkubacja z czynnikiem stymulującym tworzenie kolonii makrofagów i interleukiną-4 indukuje przeciwzapalną produkcję makrofagów M2.

Protokół

Wszystkie procedury z udziałem ludzi zostały przeprowadzone zgodnie z instytucjonalnymi, krajowymi i międzynarodowymi wytycznymi dotyczącymi dobrobytu ludzi i zostały sprawdzone przez lokalną komisję rewizyjną instytucji.

1. Różnicowanie i polaryzacja komórek pochodzących z monocytów

1. Do izolacji monocytów należy stosować przyleganie z tworzywa sztucznego. Krótko wysiać świeżo wyizolowane jednojądrzaste komórki krwi obwodowej (PBMC) na 6-dołkowej płytce hodowlanej o odpowiednim stężeniu, np. 10 x 10⁶ PBMC/basenik w 2 ml pożywki RPMI bez surowicy (uzupełnić RPMI 1640 1 mM pirogronian sodu, 2 mM L-glutam....

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Falcon 6-dołkowe płytki z płaskim dnem	Nauki przyrodnicze Corning	353046
GM-CSF (Instrument Zarządzania Mózgowo-T	Peprotech	300-03
IFN-γ	Peprotech	300-02
Ił-4	Peprotech	200-04
L-glutamina	GE Healthcare Nauki przyrodnicze	SH30034.01
M-CSF (Płyn mózgowy)	Peprotech	300-25
Silnik RPMI 1640	Korporacja Technologii Życiowych	SH30096.01
Surowica płodowa bydlęca (FBS)	Sigma-Aldrich	F7524
HEPESY	GE Healthcare Nauki przyrodnicze	SH30237.01
LPS (Escherichia coli O55:B5)	Sigma-Aldrich	Zobacz materiał L6529
Na-pirogronian	GE Healthcare Nauki przyrodnicze	SH300239.01

TGL Rozdział powiedział: