Aktywacja makrofagów pochodzących ze szpiku kostnego myszy w odpowiedzi na przeciwciała

Streszczenie

Źródło: Kozicky, L. et al., Ocena wpływu leków opartych na przeciwciałach na mysi szpik kostny i aktywację makrofagów otrzewnowych. J. Vis. Exp. (2017)

W tym filmie pokazujemy aktywację makrofagów pochodzących ze szpiku kostnego w odpowiedzi na bakteryjny lipopolisacharyd i dożylną immunoglobulinę.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Pozyskiwanie i aktywacja makrofagów szpiku kostnego za pomocą przeciwciał

1. Przeprowadzić eutanazję za pomocą uduszenia CO₂ .
   1. Umieść mysz w komorze indukcyjnej. Poddaj mysz eutanazji 5% znieczuleniem izofluranem przez 60 - 90 sekund, aż do unieruchomienia, a oddech będzie głęboki i powolny.
   2. Wyłącz znieczulenie izofluranem i podawaj 6 - 8 l/min CO₂ do momentu, aż mysz przestanie oddychać. Pozostaw m....

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Zmodyfikowany medium Dulbecco firmy Iscove (IMDM)	Technologie życiowe	12440053
Płodowa surowica bydlęca (FBS)	Technologie życiowe	Numer katalogowy 12483-020
Rekombinowany mysi czynnik stymulujący tworzenie kolonii makrofagów (MCSF)	Technologie komórek macierzystych	Numer katalogowy: 78059
Penicylina-streptomycyna	Technologie życiowe	15140148
Bufor dysocjacji komórek	Technologie życiowe	13150016	Bez enzymów, na bazie Hanksa, EDTA
Lipopolisacharyd (LPS)	Sigma aldrich	L 4516	Od E. coli 0127:B8
IVIg (Gammunex)	Grifols powiedział:	Otrzymany ze Szpitala Dziecięcego BC, Medycyna Transfuzjologiczna
IVIg (płyn Gammagarda)	Korporacja Baxter Healthcare	Otrzymany ze Szpitala Dziecięcego BC, Medycyna Transfuzjologiczna
IVIg (oktagam)	Octapharma (oktapharma)	Otrzymany ze Szpitala Dziecięcego BC, Medycyna Transfuzjologiczna
Solanka fizjologiczna buforowana fosforanami (PBS) (sterylna), pH 7,4	Technologie życiowe	10010023
Mysz IL-10 ELISA	BD nauki biologiczne	555252
Mysz IL-12/23p40 ELISA	BD nauki biologiczne	555165
Rurka stożkowa 15 ml	BD nauki biologiczne	352096
Probówka stożkowa 50 ml	BD nauki biologiczne	Numer katalogowy: 352070
Probówka do mikrowirówek (1,7 ml)	Diamed	SPE155-N
75 cm2 kolba poddana hodowli tkankowej	BD nauki biologiczne	353136
Skrobak do komórek	BD nauki biologiczne	353085