Dynamika organelli w limfocytach B po aktywacji kulkami pokrytymi antygenem

Streszczenie

Źródło: Ibañez-Vega, J., et al., Badanie dynamiki organelli w komórkach B podczas tworzenia synaps immunologicznych. J. Vis. Exp. (2019 rok)

W tym filmie opisujemy metodę badania dynamiki organelli w limfocytach B po ich aktywacji za pomocą mikrogranulek pokrytych antygenem.

Protokół

UWAGA: Następujące kroki zostały wykonane przy użyciu komórek B IIA1.6.

1. Aktywacja limfocytów B za pomocą koralików pokrytych antygenem

1. Przygotowanie kulek pokrytych antygenem
   1. Aby aktywować limfocyty B, użyj kulek NH₂ kowalencyjnie pokrytych antygenem (kulki pokryte Ag), które są przygotowywane przy użyciu 50 μL (~20 x 10⁶ kulek) 3 μm_NH 2-kulek z antygenami aktywującymi (BCR-ligand+) lub nieaktywującymi (BCR-ligand-).
   2. W przypadku komórek B IIA1.6 należy użyć fragmentu anty-IgG-F(ab')₂ jako BCR-ligand+ i anty-Ig....

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
IIA1.6 (wariant A20) mysie komórki chłoniaka B	Kontroler ATCC (Kontroler T	TIB-208	Mysi chłoniak z komórek B pochodzenia Balb/c, który wykazuje ekspresję BCR zawierającego IgG na swojej powierzchni bez FcγIIR
100% metanol	Fisher Naukowy	A412-4
Szkiełka nakrywkowe o średnicy 10 mm grubość nr 1 okrągłe	Marienfield-Superior (Marienfield-Superior)	Numer katalogowy: 111500
Amino-Dynabeads	Rybak termiczny	Numer katalogowy 14307D
Anty-perycentryna	Księga Abcam	ab4448	Zalecane rozcieńczenie 1:200, ale powinno być zoptymalizowane
Anty-rab6	Księga Abcam	ab95954	Zalecane rozcieńczenie 1:200, ale powinno być zoptymalizowane
Anty-sec61	Księga Abcam	ab15575	Zalecane rozcieńczenie 1:200, ale powinno być zoptymalizowane
Bsa	Winkler	Zobacz materiał BM-0150
Mikrosfery aminowe Polybead 3,00 μm	Polinauka	Numer katalogowy: 17145-5
Poli-L-lizyna	Sigma	Zobacz materiał P8920	Rozcieńczyć sterylną wodą
Przekaźnik RPMI-1640	Przemysł biologiczny	01-104-1A
Tryton X-100	Merck	9036-19-5
Tubka 50 ml	Corning	353043

powiedział: powiedział: powiedział: powiedział: powiedział: powiedział: