Analiza wpływu preparatów wyrobów tytoniowych na produkcję cytokin za pomocą barwienia wewnątrzkomórkowego i cytometrii przepływowej

Streszczenie

Źródło: Arimilli, S. et al., Metody oceny cytotoksyczności i immunosupresji preparatów palnych wyrobów tytoniowych.J. Vis. Exp.(2015)

Ten film pokazuje wpływ preparatów wyrobów tytoniowych, TPP, na produkcję cytokin z ludzkich komórek jednojądrzastych krwi obwodowej za pomocą cytometrii przepływowej. Leczenie komórek TPP obniża produkcję cytokin prozapalnych, którą szacuje się po stymulacji lipopolisacharydami, a następnie barwieniu immunologicznym i analizie cytometrii przepływowej.

Protokół

Wszystkie procedury z udziałem ludzi zostały przeprowadzone zgodnie z instytucjonalnymi, krajowymi i międzynarodowymi wytycznymi dotyczącymi dobrobytu ludzi i zostały sprawdzone przez lokalną komisję rewizyjną instytucji.

1. Przygotowanie do WS-CM

1. Wygeneruj całe medium kondycjonowane dymem (WS-CM) zgodnie z wcześniejszym opisem.
   1. Przygotuj WS-CM, przepuszczając dym z czterech papierosów referencyjnych 3R4F przez podłoże Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 bez czerwieni fenolowej, stosując następujący schemat palenia: odpowiednio 35-60-2, objętość zaciągnięcia w ml, odstęp między zaciągnięciami....

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
12 x 75 tub	BD Sokół	352058
Probówki stożkowe 15 ml	Corning	Numer telefonu 430790
2 ml mikroprobówek	Axygen (Axigen	MCT-150-C-S
Papierosy referencyjne 3R4F	Uniwersytet Kentucky, Wyższa Szkoła Rolnicza	3R4F
Probówki stożkowe 50 ml	Corning	430828
Butelka 500 ml	Corning	430282
96-dołkowa płyta z płaskim dnem	Termo Nunc	439454
Kaptur do hodowli komórkowych	Thermo Scientific	Seria 1300 A2
wirówka	Eppendorf	58110R
Cytofix/Cytoperm (Permwash)	BD Nauki biologiczne	555028	łatwopalny
FBS (Sieć Usługowa	Sigma-Aldrich	F2442
Jednostka filtrująca	Nalgene powiedział:	156-4020
Cytometr przepływowy	BD Nauki biologiczne	FACS Canto II	8 kolorów, w Ex 405 i Em785.
Cytometr przepływowy	BD Nauki biologiczne	FACS Calibur	4 kolory w Ex 495 i Em 785.
Oprogramowanie do analizy cytometrii przepływowej	Gwiazda drzewa	FlowJo
Pojemnik do zamrażania	Nalgene powiedział:	5100-0001	Zawiera DMSO, działa drażniąco
Wtyczka GogliPlug	BD Nauki biologiczne	555029	Rakotwórcze, drażniące,
Przeciwciało IFN-γ V-500	BD Horyzont	Numer katalogowy: 561980	Działa uczulająco na skórę
Bufor izolacyjny	Isolymph, CTL Scientific Corp.	1114868	Ciecz łatwopalna, Drażniąca
Izopropylowy	Sigma-Aldrich	W292907
L-glutamina	Technologie życiowe Gibco	25030-081
Lps	Sigma-Aldrich	L2630
Przeciwciało MIP1-α PE	BD Pharmingen	Numer katalogowy: 554730	Ostra toksyczność, Doustnie
nikotyna	Sigma-Aldrich	Numer katalogowy N3876	Toksyczność ostra, Zagrożenie dla środowiska
Parafilm	Bemis	"M"
Paraformaldehyd	Sigma-Aldrich	Zobacz materiał P6148	Łatwopalny, Działanie drażniące na skórę
Pióro/paciorkowiec	Technologie życiowe Gibco	Rozdział 15140-122
Silnik RPMI 1640	Technologie życiowe Gibco	Numer katalogowy 11875-093
Uruchomiony bufor	Bufor do biegania MACS, Miltenyi Biotech	130-091-221
Przeciwciało TNF-α Alexa Fluor 488	Legenda biologiczna	502915
Pipeta transferowa	Fisher Naukowy	Numer katalogowy: 13-711-20

) powiedział: powiedział: powiedział: