Technika oceny odpowiedzi immunologicznej na antygen poprzez wywoływanie stanu zapalnego skóry

Streszczenie

Źródło: Yao, Y., et al. Intravital Imaging of Neutrophil Priming using IL-1β Motor-driven DsRed Reporter Mice. J. Vis. Exp. (2016).

Ten film demonstruje technikę in vivo oceny testowego antygenu poprzez wywoływanie stanu zapalnego skóry w modelu mysim. Antygen testowy - hapten w roztworze oleju / acetonu - jest miejscowo nakładany na skórę ucha myszy, a stan zapalny skóry ocenia się po odpowiednim czasie.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Indukcja stanu zapalnego skóry u myszy pIL1-DsRed

1. Znieczulić mysz przez dootrzewnowe (i.p.) wstrzyknięcie koktajlu znieczulającego zawierającego 100 mg/kg ketaminy, 10 mg/kg ksylazyny i 1 mg/kg acepromazyny. Odpowiednio znieczulone myszy nie wykazują wycofania tylnej łapy do uszczypnięcia palca.
2. Nałóż krem do depilacji na grzbietową powierzchnię obu uszu myszy. Odczekaj od 30 sekund do 1 minuty. Wytrzyj powierzchnię ucha bawełną nasączoną wodą i pozostaw do wyschnięcia na powietrzu.
3. Zmierz grubość ucha za pomocą mikrometru i umieść mysz w osobnej klatce. Obserwuj aż do wyzdrowienia ze znieczulenia (~ 15 - 30 min). Aby rozwiązać stan zapalny skóry wywołany przez produkt do usuwania włosów, pozwól myszy odpocząć przez 3 dni przed przeprowadzeniem dalszych eksperymentów.
4. Przygotować 1,25% (w/v) oksazolonu (OX), rozpuszczając 16,7 mg OX w 1 ml acetonu i mieszając 750 μl roztworu OX/acetonu z 250 μl oliwy z oliwek. Przygotować roztwór do podłoża, mieszając 750 μl acetonu z 250 μl oliwy z oliwek.
5. Ponownie znieczulić mysz przez dootrzewnowe (i.p.) wstrzyknięcie koktajlu znieczulającego (1.1). Zmierz grubość ucha jak poprzednio.
6. Nałóż 12,5 μl 1,25% OX na każdą stronę prawego ucha. Nałóż 12,5 μl roztworu acetonu/oliwy z oliwek na każdą stronę lewego ucha.
7. Trzymaj mysz oddzielnie od współwięźniów w klatce, dopóki nie odzyskasz pełnej sprawności, aby zapobiec obrażeniu jej uszu przez inne myszy, a następnie umieść mysz w oryginalnej klatce i zwróć ją do pomieszczenia dla zwierząt.
   nuta: Depilacja może skutkować niewielkimi stanami zapalnymi skóry, a następnie zmianą grubości uszu. Ten niewielki stan zapalny zostanie rozwiązany 3 dni później, potwierdzony normalną grubością ucha. Po miejscowym stosowaniu przez 24 godziny, uszy leczone OX wykazują znaczny (p < 0,01) obrzęk w porównaniu z uszami leczonymi samym roztworem nośnika.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Chlorowodorek ketaminy	Hospira	NDC 0409-2051-05
Ksylazyna	Laboratorium LLOYD	NADA #139-236
Acepromazyna	Boehringer Ingelheim	ANADA 200-361
Krem do depilacji	Kościół i Dwight
aceton	Fisher Naukowy	Zobacz materiał A16P4
Oksazolon	Sigma-Aldrich	E0753

powiedział: