Generowanie rany wycinającej skórę w modelu mysim za pomocą biopsji dziurkowej

Streszczenie

Źródło: Anderson, L. S. et al., Mysi model do oceny wrodzonej odpowiedzi immunologicznej na zakażenie Staphylococcus aureus. J. Vis. Exp. (2019)

Ten film demonstruje procedurę biopsji ciosu w celu stworzenia precyzyjnej rany w modelu mysim. Wycięcie odsłania podskórną warstwę skóry, zapewniając odpowiednie miejsce do badania odpowiedzi immunologicznej na zlokalizowane zakażenie patogenem.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Źródło i obudowa myszy

1. Wyprowadź myszy z białka zielonej fluorescencji wzmocnionego lizozymem M (LysM-eGFP) na tle genetycznym C57BL / 6J, jak opisano wcześniej. Wyprowadź LysM-EGFP× różnicowanie szpiku pierwotnej odpowiedzi 88 (MyD88) -/- myszy, krzyżując myszy LysM-EGFP z MyD88-/- myszy na tle C57BL / 6J.
2. Myszy domowe w wiwarium. W tych badaniach zwierzęta były trzymane na Uniwersytecie Kalifornijskim w Davis w grupach przed operacją i pojedynczo po operacji. Używaj myszy w wieku od 10 do 16 tygodni.

2. Cięcie skóry

1. Podaj 100 μl 0,03 mg/ml chlorowodorku buprenorfiny (~0,2 mg/kg) każdej myszy we wstrzyknięciu dootrzewnowym.
2. Dwadzieścia minut po wstrzyknięciu umieść 2-4 myszy w komorze z 2-3 litrami tlenu na minutę (LPM) z 2-4% izofluranem. Gdy myszy zostaną w pełni znieczulone, przenieś myszy pojedynczo do stożka nosowego podłączonego do 2-3 l/min tlenu z 2-4% izofluranem. Sprawdź, czy myszy są w pełni znieczulone, mocno ściskając każdą tylną łapę między kciukiem a palcem wskazującym. Przejdź do następnego kroku, jeśli zwierzę nie reaguje na szczypanie.
3. Ogol sekcję o wymiarach 1 cal na 2 cale z tyłu myszy za pomocą elektrycznych maszynek do strzyżenia i oczyść obszar ze ścinków futra za pomocą czystej ściereczki lub gazy. Unikaj stosowania balsamu do depilacji, ponieważ może on powodować nadmierny stan zapalny.
4. Wyczyść tył myszy najpierw 10% gazą nasączoną jodonem powidonem, a następnie 70% gazą nasączoną etanolem. Oczyść obszar spiralnie, przesuwając się na zewnątrz od środka pola operacyjnego. Przed zabiegiem odczekaj około 1 minuty, aż obszar operacyjny wyschnie.
5. Przytrzymaj ogolony grzbiet myszy luźno między dwoma palcami i mocno dociśnij sterylną biopsję dziurkowaną 6 mm na środku przygotowanego obszaru operacyjnego. Nie naciągaj skóry.
   1. Przekręć biopsję stempla, aby utworzyć okrągły kontur na skórze, który całkowicie przecina skórę w co najmniej jednej części konturu. Uważaj, aby nie przeciąć leżącej pod spodem powięzi lub tkanki.
   2. Użyj sterylnych nożyczek i kleszczy, aby przeciąć naskórek i skórę właściwą, postępując zgodnie z okrągłym wzorem odciśniętym przez biopsję stempla.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Jednorazowy dziurkacz do biopsji 6 mm	Integra Miltex	33-36 Rozdział 33-36
Chlorowodorek buprenoprhiny do wstrzykiwań	Zachodnie zaopatrzenie medyczne	Zobacz materiał 7292	0,3 mg/ml
Myszy C57BL/6J	Laboratorium Jacksona	664
Myszy LysM-eGFP	Thomas Graff, Albert Einstein College, Nowy Jork	nie
Myszki MyD88 KO	Laboratorium Jacksona	Numer katalogowy 9088
Gąbki włókninowe	AMD- Ritmed Inc	A2101-CH	5 cm x 5 cm
Jod powidonu 10% roztwór	Aplicare	697731

TGL TGL