Określenie roli witronektyny w oporności bakterii na działanie bakteriobójcze surowicy ludzkiej

Streszczenie

Źródło: Singh, B. et al., Testy do badania roli witronektyny w adhezji bakteryjnej i odporności surowicy.J. Vis. Exp.(2018)

Ten film pokazuje rolę witronektyny, ludzkiej glikoproteiny surowicy, na odporność bakterii. Przeciwciała w surowicy oddziałują z białkami powierzchniowymi bakterii, aktywując białka dopełniacza i tworząc kompleks ataku błonowego, powodując lizę komórek bakteryjnych. Wiązanie witronektyny z białkiem błony bakteryjnej zapobiega tworzeniu się kompleksu ataku błony, co skutkuje przeżyciem bakterii.

Protokół

Wszystkie procedury związane z pobieraniem próbek zostały przeprowadzone zgodnie z wytycznymi instytutu IRB.

1. Analiza zależnej od Vn odporności na bakteriobójcze działanie ludzkiej surowicy

1. Kup normalną ludzką surowicę (NHS) ze źródła komercyjnego. Przygotować witronektynę lub surowicę zubożoną w Vn (VDS). Uzupełnij VDS o 180 nM Vn, co odpowiada Vn obecnemu w NHS.
2. Przygotować surowicę inaktywowaną termicznie (HIS) poprzez ogrzewanie NHS w temperaturze 56 °C przez 30 minut w celu inaktywacji białek dopełniacza.
   nuta: Optymalne stężenie w surowicy (5%) i czas inkubacji (15 min)....

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
6 ml probówka okrągłodenna z polistyrenu	Firma VWR	89000-478	12 × 75 mm z zaślepką
Normalna surowica ludzka (NHS)	Complement Technology, Inc.	Nhs	Zbiorcza surowica ludzka
Chlorek wapnia (CaCl2)	Sigma-Aldrich	Zobacz materiał C5670-500G
glukoza	Sigma-Aldrich	G8270-1KG
żelatyna	Sigma-Aldrich	Zobacz materiał G9391	Nadaje się do hodowli komórkowych
Hemocytometr	Lotnisko Marienfeld	Numer katalogowy: 640210
Chlorek magnezu (MgCl2)	Sigma-Aldrich	Zobacz materiał M8266-1KG
Witronektyna (Vn) z osocza ludzkiego	Sigma-Aldrich	V8379-50UG	Klasa hodowli komórkowej
Shakerze bostońskim	Stuart Naukowy	Zobacz materiał STR6	Wytrząsarka platformy