Model myszy w woreczku powietrznym do zbierania wysięku zapalnego wywołanego lipopolisacharydem

Streszczenie

Źródło: Lu, Q., et al. Wykrywanie migracji i infiltracji neutrofili u myszy. J. Vis. Exp.(2020).

Ten film opisuje procedurę generowania torebki powietrznej w tkance podskórnej myszy i zbierania wysięków zapalnych w odpowiedzi na podanie lipopolisacharydu in vivo. Ten film obejmuje również analizę infiltracji neutrofili w woreczku powietrznym.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Test z użyciem torebki powietrznej

1. Pierwszy wtrysk powietrza
   1. W dniu 0 należy w pełni znieczulić myszy 5% izofluranem przez 3 minuty w komorze do znieczulenia gazowego z prędkością 2 l/min i utrzymywać znieczulenie każdej myszy w pojedynczej jednostce oddechowej z 2% izofluranem z prędkością 0,5 l/min.
      nuta: Wystarczającą głębokość znieczulenia zapewnia się poprzez uszczypnięcie palców u ....

Wyniki

Rysunek 1: Reprezentatywne wyniki testu w woreczku powietrznym. (A) Ilustracja testu z użyciem torebki powietrznej. (B) Reprezentatywne wyniki infiltracji podzbioru leukocytów w teście worka powietrznego. PBS: kontrola; LPS: 1 µg/mL LPS. Dane są prezentowane jako średnia ± SD.

....

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
100% etanol	Pekińskie Zakłady Chemiczne
100% metanol	Pekińskie Zakłady Chemiczne
15 ml stożkowa polipropylenowa probówka wirówkowa	sokół	sokół
Igła 23 G x 1 1/4"	Bd	Numer katalogowy: 305120
Igła 26 G x 3/8"	Bd	Numer katalogowy: 305110
Igła 30 G x 1/2"	Bd	305106
Strzykawka 5 ml	Bd	Z683574
50 ml stożkowa probówka wirówkowa z polipropylenu	sokół	Numer katalogowy: 14-432-22
System znieczulenia gazowego	ZS Dichuang	ZS-MV-IV
sól fizjologiczna buforowana fosforanami (PBS), 1×			Zmieszać 90% ddH2O z 10% (v/v) 10×PBS, autoklawizowanym
Sól fizjologiczna buforowana fosforanami (PBS), 10×			Rozpuścić 16 g NaCl, 0,4 g KCl, 2,88 g Na2HPO4·2H2O, 0,48 g KH2PO4 (bezwodny) w 200 ml ddH2O, dostosować pH 7,4, w autoklawie
Lipopolisacharyd (LPS)	Sigma	L3012
Bufor do przemywania w teście powietrznym			Rozcieńczyć 0,5 M EDTA do 10 mM za pomocą HBSS