Technika generowania mysiego modelu zapalenia stawów wywołanego adiuwantem

Streszczenie

Źródło: Lu, Q., et al. Wykrywanie migracji i infiltracji neutrofili u myszy. J. Vis. Exp. (2020).

Ten film demonstruje metodę generowania zapalenia stawów wywołanego adiuwantem w modelu mysim. Kompletny adiuwant Freunda (CFA) jest wstrzykiwany w staw skokowy myszy i obszary okołostawowe. CFA aktywuje układ odpornościowy, prowadząc do nacieku neutrofili i nasilenia stanu zapalnego.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Indukcja mysiego modelu zapalenia stawów wywołanego adiuwantem (AA)

1. Zawiesić pełny adiuwant Freunda (CFA) przez wirowanie co najmniej 5 s, a następnie pobrać 100 μl zawiesiny do wstrzykiwacza insuliny.
   nuta: Zalecamy stosowanie w eksperymentach zupełnie nowego CFA, aby zapewnić sterylność.
2. Znieczulić myszy zgodnie z opisem.
3. Zaznacz wybraną łapę i wstrzyknij 20 μl CFA w przestrzeń stawu skokowego. Wstrzyknąć 20 μl zawiesiny w cztery okołostawowe miejsca na wybranej łapie (łącznie 80 μl).
4. Wyjmij myszy z jednostki oddechowej i umieść przetworzone myszy w nowej komorze. Monitoruj myszy, aby upewnić się, że oddychają, dopóki nie odzyskają zdolności poruszania się.
5. Co 3 dni oceniaj średnicę stawu, mierząc średnicę stawu skokowego za pomocą grubościomierza kieszeniowego (ryc. 1A).
6. Co 3 dni oceniaj nasilenie zapalenia stawów za pomocą kryterium punktacji zapalenia stawów (ryc. 1C): 0, normalny, brak oznak rumienia i obrzęku; 1, najłagodniejsze zapalenie stawów, rumień i łagodny obrzęk ograniczony do stępu lub stawu skokowego; 2, umiarkowane zapalenie stawów, rumień i łagodny obrzęk rozciągający się od kostki do stępu; 3, ciężkie zapalenie stawów, rumień i umiarkowany obrzęk rozciągający się od kostki do stawów śródstopia; 4, Najcięższe zapalenie stawów, rumień i silny obrzęk obejmują kostkę, stopę i palce lub zesztywnienie kończyny.

Wyniki

Rycina 1: Reprezentatywne wyniki mysiego modelu zapalenia stawów wywołanego adiuwantem (AA). (A) Średnicę stawu skokowego zmierzono za pomocą grubościomierza kieszeniowego. (B) Obrzęk stawu oceniano na podstawie średnicy stawu skokowego (n = 7). (C) Zdjęcia każdego wyniku zapalenia stawów. (D) Nasilenie zapalenia stawów oceniano w s...

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
15 ml stożkowa polipropylenowa probówka wirówkowa	sokół	14-959-53A
Igła 23 G x 1 1/4"	Bd	Numer katalogowy: 305120
Igła 26 G x 3/8"	Bd	Numer katalogowy: 305110
Igła 30 G x 1/2"	Bd	305106
Kompletny adiuwant Freunda, 10 mg/ml	Sigma	1002036152
Mikroprobówki Eppendorf, 1,5 ml	Sigma	Z606340
Miernik grubości zegara	Mitutoyo powiedział:	Zobacz materiał 7301
Shu Rui U40 Jednorazowa sterylna igła do wstrzykiwań insuliny 1 ml	Bd	328421