Indukcja choroby przeszczep przeciwko gospodarzowi w modelach mysich za pomocą allogenicznego przeszczepu szpiku kostnego i komórek śledziony

Streszczenie

Źródło: Buchele, V., et al. Indukcja choroby przeszczep jelitowy przeciwko gospodarzowi i jej mini-endoskopowa ocena u żywych myszy. J. Vis. Exp. (2019).

Ten film demonstruje indukcję choroby jelitowej przeszczep przeciwko gospodarzowi, GvHD, u śmiertelnie napromieniowanej myszy biorcy przy użyciu allogenicznych hematopoetycznych komórek macierzystych i indukujących GvHD alloreaktywnych limfocytów T indukujących śledzionę. Protokół ten pomaga w ustaleniu modelu ciężkiej ostrej choroby jelitowej GvHD, aby zrozumieć mechanizm choroby i opracować innowacyjne opcje terapeutyczne.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Indukcja GvHD

1. Dzień 0: Napromienianie całego ciała myszy biorcy
   1. Jako biorców należy użyć samic myszy CD45.2+ H2kd+ BALB/c, które mają co najmniej 10 tygodni.
   2. Zważ i zapisz wagę myszy biorcy przed indukcją GvHD.
      nuta: Upewnij się, że odbiorca ma minimalną masę ciała wynoszącą 20 g. Wyjściowa masa ciała posłuży jako wartość referencyjna do obliczenia utraty masy....

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Promiennik promieniowania gamma BIOBEAM 2000	Gamma-Service Meical GmbH
Solanka fizjologiczna buforowana fosforanami (PBS)	Sigma-Aldrich Co., Sp. z o.o.	D8662-6x500ML
Kleszcze Semken (długość: 13 cm; ząbkowane, zakrzywione końcówki)	Narzędzia naukowe	11009-13
Hartowane nożyczki drobne (długość: 8,5 cm; końcówki proste; krawędź tnąca: 24 mm)	Narzędzia naukowe	Numer katalogowy 14090-09
RPMI-1640 Średni	Sigma-Aldrich Co., Sp. z o.o.	Czynnik chłodniczy R8758-500ML
Igła podskórna (26G)	B. Braun Melsungen AG	4657683
Strzykawka 1 ml	B. Braun Melsungen AG	9166017V
Probówka 50 ml	Sarstedt Ag & Co.KG	6,25,47,254
Sitko do komórek z siatką 40 μm	BD Sokół	Numer telefonu 352340
Strzykawka insulinowa ze sterylnym wnętrzem (30G)	Bd	324826
Zestaw do izolacji komórek Pan T II, mysz	Miltenyi Biotec GmbH	Numer katalogowy: 130-095-130	Separacja komórek magnetycznych w celu wyizolowania limfocytów T śledziony
CD90.2 Mikrokulki MicroBeads, mysz	Miltenyi Biotec GmbH	Numer katalogowy: 130-049-101	magnetyczna separacja komórek w celu wyizolowania komórek szpiku kostnego zubożonych w limfocyty T
Kleszcze do biopsji	KARL STORZ SE &Co KG	61071 ZJ	Część zestawu doświadczalnego do kolonoskopii
Sól disodowa kwasu etylenodiaminotetraoctowego, dwuwodna (Na2EDTA)	Carl Roth GmbH & Co.KG	8043.2	składnik buforu lizującego ACK
Przeciwciało anty-mysie CD45.2 Alexa Fluor 700 (klon: 104; partia: B252126; RRID: AB_493731)	Legenda biologiczna	109822
PE/Cy7 przeciwciało anty-mysie CD45.1 (klon: A20; partia: B217246; RRID: AB_1134168)	Legenda biologiczna	Numer katalogowy: 110730
Przeciwciało anty-mysie CD8a APC/Cy7 (klon: 53-6,7, partia: B247008; RRID: AB_312753)	Legenda biologiczna	100714
Foran / Izofluran	AbbVie Inc.	Zobacz materiał B506
Przefiltrowana surowica bydlęca	Pan Biotec	P40-47500	składnik buforu FACS

TGL powiedział: