$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.
1. Eksperymentalne autoimmunologiczne zapalenie mózgu i rdzenia lub model EAE
- Wprowadzenie modelu EAE
- Do indukcji EAE należy użyć 10- do 13-tygodniowych samic myszy 129S4/SvJae×C57BL/6.
- Podać myszom podskórne wstrzyknięcie w górną i dolną część pleców encefalitogennego peptydu MOG35 - 55 (glikoproteina mielinowa oligodendrocytów) (200 μg), zemulgowanego w 200 μl kompletnego adiuwantu Freunda (CFA) zawierającego 400 μg Mycobacterium tuberculosis.
nuta: Jako ujemną, niewywołującą choroby kontrolę pozorowaną, można zastosować niekompletny adiuwant Freunda zawierający Mycobacterium tuberculosis, w tej samej objętości i tą samą drogą.
- Następnie, i ponownie 24 godziny później, należy podać myszom dootrzewnowe wstrzyknięcie toksyny krztuścowej (w sumie 0,2 μg, rozcieńczonej w 200 μl soli fizjologicznej buforowanej fosforanami, PBS). Użyj nieleczonych myszy jako grupy kontrolnej, aby móc porównać chore ze zdrowymi zwierzętami.
nuta: Możliwe jest również wywołanie EAE za pomocą 200 - 300 μg peptydu MOG35 - 55, 300 - 500 μg Mycobacterium tuberculosis w CFA i 0,2 - 0,3 μg toksyny krztuścowej w objętości 0,1 - 0,2 ml na wstrzyknięcie.
- Począwszy od tygodnia po wstrzyknięciu, należy codziennie badać myszy pod kątem objawów klinicznych (patrz krok 1.2.1)
nuta: Dzień wystąpienia choroby różni się w różnych eksperymentach, ale w warunkach panujących w naszym laboratorium jest to około 11 dnia, a zatem tutaj dzień 14 definiuje się jako 3 dni po wystąpieniu choroby. U wszystkich myszy w niniejszym badaniu wystąpiły objawy kliniczne.
2. Punktacja myszy
- Sklasyfikuj objawy kliniczne według wyników klinicznych w następujący sposób: 0) brak objawów, 0,5) porażenie dystalne ogona, 1) całkowity paraliż ogona, 1,5) utykanie ogona i łagodne osłabienie tylnych nóg, 2) wiotki ogon i silne osłabienie tylnych nóg, 2,5) wiotki ogon i paraliż jednej tylnej nogi, 3) wiotki ogon i paraliż obu tylnych nóg, 3.5) paraliż obu kończyn tylnych i osłabienie jednej kończyny przedniej (myszy osiągające ten wynik zostały poddane eutanazji, zgodnie z lokalnymi wytycznymi etycznymi).