Method Article

Test bakteriobójczy surowicy na działanie bakteriobójcze przeciwciał za pośrednictwem dopełniacza

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Źródło: Weerts, H. P., et al. Wysokoprzepustowy test bakteriobójczy specyficzny dla Shigella. J. Vis. Exp. (2019).

Ten film demonstruje technikę oceny działania bakteriobójczego przeciwciał obecnych w surowicy, w którym pośredniczy dopełniacz. Podejście to łączy wyizolowaną surowicę z bakteriami chorobotwórczymi i egzogennymi białkami dopełniacza. Podczas inkubacji bakterie są hodowane na płytce agarowej, a wytworzone kolonie są oznaczane ilościowo w celu zmierzenia miana bakteriobójczego surowicy.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Przygotowanie dopełniacza i docelowej bakterii

  1. Przygotuj uzupełnienie dla małego królika (BRC)
    UWAGA:     Szczegółowe kryteria doboru partii uzupełniających można znaleźć tutaj: https://www.vaccine.uab.edu/uploads/mdocs/UAB-MOPA.pdf
    1. Uzyskaj zamrożony BRC i rozmrozić pod bieżącą zimną wodą. Fizycznie mieszaj BRC co ~10-20 minut, aż do całkowitego rozmrożenia. Nie poddawaj BRC powtarzającym się cyklom zamrażania i rozmrażania.
    2. Podczas rozmrażania BRC oznacz probówki wirówkowe o pojemności 1.5 ml, 5 ml lub 15 ml. Umieść oznaczone rurki na lodzie, aby wstępnie ostygły. Porcję odpowiedniej objętości....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
Rysunek 1: Płytki LBA po wywołaniu koloru. Reprezentatywne mikrokolonie bakteryjne S. flexneri 3a urosły z dnia na dzień do odpowiednich rozmiarów. Dodano agar nakładkowy, a kolonie rozwinęły czerwony kolor przez redukcję związku TTC w agarze nakładkowym.

figure-results-2

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Nie stwierdzono konfliktu interesów.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
żelatynaSigmaZobacz materiał G9391Typ B, proszek, BioReagent, odpowiedni do hodowli komórkowych
TTC (chlorek 2,3,5-trifenylotetrazolu)SigmaZobacz materiał T8877≥98,0% (HPLC)
Azydek sodu (NaN3)SigmaS2002≥99,5%
Uzupełnienie dla małego królikaPelFreez (PelFreez)31061-33-4 tygodniowe
HBSS z Ca2+/Mg2+InvitrogenNumer katalogowy: 14065-56Bez czerwieni fenolowej
Agar LB (Lennox)SigmaL2897Pożywka mikrobiologiczna w proszku
Agar BactoBdNumer katalogowy 214010Sproszkowany, (C12H18O9)n
glicerolSigmaZobacz materiał G5516Dla biologii molekularnej, ≥99%
Rosół LB (Lennox)SigmaL3022Pożywka mikrobiologiczna w proszku
Kwadratowa szalka PetriegoSigmaZ617679-240EA120 mm x 120 mm
Płytka testowaCostarNumer katalogowy: 379996-dołkowa płyta dolna w kształcie litery U z pokrywką
Oprogramowanie NICEUniwersytet Alabamy w Birminghamftp://ftp.nist.gov/pub/physics/mlclarke/NICE/
TGL TGL

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Serum Bactericidal AssayComplement Mediated Bactericidal ActivityAntibody LPS BindingSerial Dilution ProtocolBacterial Colony EnumerationTTC Overlay AgarHeat Inactivated ComplementMicrobiological IncubatorDigital Colony AnalysisGram Negative Bacteria

Related Articles