Test infekcji bakteryjnej do badania interakcji bakterii beztlenowych z komórkami gospodarza

Streszczenie

Źródło: Wunsch, C. M., et al. Porphyromonas gingivalis jako organizm modelowy do oceny interakcji bakterii beztlenowych z komórkami gospodarza. J. Vis. Exp. (2015)

Ten film demonstruje technikę oceny zdolności Porphyromonas gingivalis, beztlenowej bakterii chorobotwórczej, do przylegania i atakowania ludzkich komórek śródbłonka żyły pępowinowej (HUVEC). Po zakażeniu komórek gospodarza bakteriami, komórki gospodarza są poddawane lizie w celu uwolnienia zarówno przylegających, jak i zinternalizowanych bakterii. Gdy lizat jest posiewany w odpowiednim pożywce, obecność kolonii wskazuje na udane interakcje bakteria-komórka gospodarza.

Protokół

Następujące protokoły opiszą metody hodowli i badania inwazji gatunku beztlenowego, P. gingivalis; jednak te protokoły mogą być stosowane dla wielu patogenów beztlenowych. Chociaż stosowane są HUVEC, protokół ten może być stosowany w przypadku innych komórek eukariotycznych, zarówno immunologicznych, jak i nieimmunologicznych.

1. Użytkowanie i konserwacja komory beztlenowej

Uwaga: P. gingivalis jest beztlenowcem wrażliwym na normalne poziomy tlenu spotykane w otaczającym powietrzu. Kontrolowane środowisko beztlenowe ma zasadnicze znaczenie dla uprawy ....

Wyniki

Rysunek 1. Beztlenowa komora winylowa i jej elementy. (A) Winylowa komora anaerobowa całkowicie uszczelniona przed tlenem atmosferycznym zapewnia miejsce pracy dla dwóch osób jednocześnie (32 cale x 78 cali). Zawiera inkubator ustawiony na temperaturę 37 °C (tylny środek). (B) Śluza powietrzna służy do przenoszenia przedmiotów ze środowiska laboratoryjnego do komory.......

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Komora winylowa beztlenowa typu B	Produkty laboratoryjne Coy		Inkubator model 2000
TSA II Tryptykaza Agar sojowy z 5% krwią owczą	Bbl	221261
Pula dawców ludzkich komórek śródbłonka żyły pępowinowej 10	Technologia LifeLine	FC-0044
VascuLife VEGF Medium Kompletny zestaw	Technologia LifeLine	LL-0003
TrypKit (Zestaw próbny)	Myśli	LL-0013
Saponina	Riedel-de Haen	Numer katalogowy: 16109

(wersja angielska) powiedział: