Ocena zabijającej aktywność opsonofagocytarną wobec patogenów bakteryjnych

Streszczenie

Źródło: Paschall, A. V. et al., Test zabijania opsonofagocytarnego w celu oceny odpowiedzi immunologicznych przeciwko patogenom bakteryjnym.J. Vis. Exp.(2019 rok)

Wideo pokazuje test zabijania in vitro opsonofagocytarnego przy użyciu kohodowli ludzkich neutrofili ze Streptococcus pneumoniae. Przeciwciała i białka dopełniacza ułatwiają opsonizację bakterii, umożliwiając neutrofilom rozpoznawanie i zabijanie bakterii, wykazując skuteczną aktywność opsonofagocytarną neutrofili.

Protokół

1. Hodowla, różnicowanie i walidacja komórek HL-60

1. Przygotuj pożywkę do hodowli komórkowych HL-60 składającą się z 500 ml Roswell Park Memorial Institute (RPMI) z L-glutaminą i 50 ml inaktywowanej termicznie płodowej surowicy bydlęcej. Nie należy dodawać antybiotyków, ponieważ może to wpływać na różnicowanie komórek HL-60.
2. Do rozmnażania/utrzymania komórek HL-60 należy hodować 5 x 10⁶ komórek w 10 ml pożywki do hodowli komórek HL-60 w 75 cm² wentylowanych kolbach w temperaturze 37 °C i 5% dwutlenku węgla (CO₂ ). Pasaż komórek co 3-4 dni, aby utrzymać optymalne stężenie komórek.
   nuta....

Wyniki

Rysunek 1: Walidacja różnicowania komórek HL-60 za pomocą cytometrii przepływowej.Zróżnicowane komórki HL-60 zebrano, przemyto i ponownie zawieszono w 1 x 10⁵ komórek/ml PBS. Komórki następnie podzielono na porcje do 12 dołków (100 μl/dołek) na 96-dołkowej płytce. Komórki następnie barwiono fluorescencyjnie sprzężonymi anty-CD35, anty-CD71, aneksyną V i jodkiem propidyny. Jako kontrole uż.......

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Aneksyna V (sprzężona APC)	Legenda biologiczna	640919
Anty-CD35, ludzki (PE sprzężony)	Legenda biologiczna	333405
Anty-CD71, ludzki (sprzężony z PE)	Legenda biologiczna	334105
Szczep bakterii, który należy zastosować (np. Streptococcus pneumoniae, WU2)	Laboratorium Referencyjne Bakteryjnego Układu Oddechowego (Dr. Moon Nahm)
Płytki z agarem do krwi	Odporna diagnostyka	A10
Płodowa surowica klonów	Klon HyClone	SH30080.03
glicerol	Sigma	G9012-1L
Ogniwa HL-60	Kontroler ATCC (Kontroler T	Zobacz materiał CCL-240
Kontrola izotypu IgG (PE sprzężona)	Legenda biologiczna	400907
N,N-dimetyloformamid (DMF)	Fisher Chemiczny	UN2265
Jodek propidyny	Sigma	Zobacz materiał P4864
Pożywki RPMI z L-glutaminą	Corning	10-040-CV

powiedział: TGL