Technika oceny lokalizacji in vivo przeciwciał specyficznych dla nowotworu

Streszczenie

Źródło: Shivange, G., et al. Analiza rozkładu nowotworów i tkanek przeciwciała terapeutycznego specyficznego dla antygenu docelowego. J. Vis. Exp. (2020).

Ten film demonstruje technikę badania in vivo lokalizacji przeciwciał specyficznych dla nowotworu w modelu ksenoprzeszczepu guza myszy. Po podskórnym wstrzyknięciu komórek rakowych myszom w celu powstania guza, wstrzykuje się fluorescencyjnie znakowane przeciwciała, które wiążą się z receptorami specyficznymi dla guza, umożliwiając ocenę in vivo lokalizacji przeciwciał za pomocą obrazowania.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Ekspresja i oczyszczanie przeciwciał

1. Utrzymanie komórek jajnika chomika chińskiego (CHO)
   1. Hoduj komórki CHO w pożywce FreeStyle CHO uzupełnionej dostępnym w handlu 1x suplementem glutaminy w temperaturze 37 °C, wstrząsając z prędkością 130 obr./min z 5%_CO2 przy użyciu delongowych kolb Erlenmeyera, szklanych lub jednorazowych.
      nuta: Zdecydowanie zaleca się stosowanie kolby z przegrodą z wentylowan....

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Nośniki FreeStyle CHO	Technologie życiowe Gibco	Nr kat. # 12651-014
Anty-anty (100X)	Technologie życiowe Gibco	Nr kat. # 15240-062
Środek przeciwzbrylający	Technologie życiowe Gibco	Nr kat. # 01-0057DG
Strzykawka do insuliny BD	BD Nauki Biologiczne	Kot #329420
Suwmiarka IVIS Spectrum	PerkinElmer powiedział:	Kot #124262
CHO CD EfficientFeed B	Technologie życiowe Gibco	Nr kat. #A10240-01
Corning 500 mL DMEM (zmodyfikowane podłoże orła firmy Dulbecco)	Corning	Nr kat. # 10-13-CV
Corning 500 ml RPMI 1640	Corning	Nr kat. # 10-040-CV
Cy5 sprzężone anty-ludzkie IgG (H+L)	Jackson ImmunoResearch (badania immunologiczne Jacksona)	Nr kat. # 709-175-149
GlutaMax-I (100X)	Technologie życiowe Gibco	Nr kat. # 35050-061
Zestaw HiPure Plasmid Maxiprep	Invitrogen	Nr kat. # K21007
Kolumna HiTrap MabSelect SuRe	GE Opieka zdrowotna	Nr kat. # 11-0034-93
napar	Takara BioScience	STO344
IRDye 800CW NHS Ester	Akumulator litowo-prądowy (LI-KOR)	Kot # 929-70020
Izofluran, USP	Chciwość	Nr kat. # 11695-6777-2
Smarująca maść do oczu	Odśwież Lacri-Lube	Nr kat. #4089
Matrigel	Corning	Kot # 354234
Odczynnik do transfekcji PEI	Rybak termiczny	Kot # BMS1003A
Kasety dializacyjne Slide-A-Lyzer	Thermo Scientific	Nr kat. # 66333
Filtry próżniowe Steritop	Ekspresowy Millipore	Kot #S2GPT02RE
Trypsyna-EDTA	Technologie życiowe Gibco	Nr kat. # 15400-054
Modele eksperymentalne: Linie komórkowe
Człowiek: OVCAR-3	Kolekcja kultur typu amerykańskiego	ATCC HTB-161
Człowiek: komórki CHO-K	Stajnia przekształcona w naszym laboratorium	Kontroler ATCC CCL-61
Mysz: 4T1	Miły prezent od dr Chipa Landena, UVA
Mysz: MC38	Miły prezent od dr Suzanne Ostrand-Rosenberg, UMBC	Uwierzytelniane przez profilowanie STR
Mysz: MC38 hFOLR1	Wygenerowane w naszym laboratorium (ten artykuł)
Modele eksperymentalne: Zwierzę
Myszy: atymiczne Nude Foxn1nu/Foxn1	Envigo (Envigo)	Zamówienia wielokrotne
Myszy: NOD.Cg Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ	Laboratorium Jacksona	Zamówienia wielokrotne

powiedział: +