Test adhezji in vitro w celu wykrycia przylegania komórek rakowych do zewnątrzkomórkowych pułapek neutrofilowych

W tym artykule

Streszczenie

Najmeh, S., et al. Uproszczona izolacja i obsługa ludzkich pułapek zewnątrzkomórkowych (NET). J. Vis. Exp. (2015)

W tym filmie demonstrujemy test wykorzystujący mikroskopię fluorescencyjną do wykrywania adhezji komórek rakowych do pułapek zewnątrzkomórkowych neutrofili (NET). W studzienkach testowych obserwuje się znaczny wzrost liczby znakowanych fluorescencyjnie komórek rakowych przylegających do NET, podczas gdy studzienki potraktowane DNazą wykazują zmniejszoną adhezję komórek rakowych do NET.

Protokół

1. Test adhezji statycznej komórek rakowych NET.

Dodać 100 μl wcześniej otrzymanego materiału NET na studzienkę do 96-dołkowej płaskiej płytki dennej i pozostawić do pokrycia studzienek O/N w temperaturze 4 °C w ciemności.
Między 12 a 20 godzinami później sprawdź, czy na dnie studzienek pod mikroskopem tworzy się jednolita monowarstwa bezkomórkowych NET (ryc. 1). W tym momencie delikatnie zassaj cały nieprzylegający materiał z dołków, uważając, aby nie naruszyć monowarstwy NET na dole.
Dodać 100 μl 1% roztworu blokującego albuminę surowicy bydlęcej (BSA) do każdej studzienki i pozostawić na 1 godzinę w ....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

figure-results-1
Rysunek 1. Monowarstwa NETTO. Obrazy z mikroskopii świetlnej 96-dołkowych studzienek płytkowych pokrytych NET pokazują (A) jednolitą monowarstwę NET w całej studzience, w przeciwieństwie do (B) niewystarczającego pokrycia studzienki przerwaną warstwą NET. Podziałka skali wynosi 40 μm.