Barwienie komórek bakteryjnych i przygotowanie do badań immunologicznych

Streszczenie

Źródło: Yang, J. et al., Zautomatyzowane, wysokoprzepustowe wykrywanie przylegania bakterii do komórek gospodarza.J. Vis. Exp. (2021)

Ten film pokazuje barwienie i przygotowanie komórek bakteryjnych do badań immunologicznych przy użyciu czerwonego barwnika fluorescencyjnego. Barwione bakterie są rozcieńczane i ponownie zawieszane w pożywce wzrostowej, aby osiągnąć pożądane stężenie bakterii do infekcji komórek gospodarza, reprezentujące wielość infekcji.

Protokół

1. Rozwój i barwienie bakterii

1. Wykonuj wszystkie prace bakteryjne w komorze bezpieczeństwa biologicznego, laboratorium poziomu bezpieczeństwa biologicznego 2.
2. Zaszczepić wszystkie kultury bakterii, w tym Pseudomonas aeruginosa (PAO1), Escherichia coli, Listeria monocytogenes, Bacillus subtilis itp., z zamrożonego bulionu glicerolowego i hodować je w tryptycznym bulionie sojowym (TSB, 3 ml) w inkubatorze z wytrząsaniem w temperaturze 37 °C przez noc utrzymywanej przy prędkości 250 obr./min.
3. Następnego dnia użyj rozcieńczenia 1:100 kultury przez noc, aby zaszczepić subkulturę i hodować ....

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
10 kanałów PBS	Firma VWR	Numer katalogowy: 45001-130
BactoView na żywo czerwony	Biot	Numer katalogowy: 40101	Barwnik zwalczający bakterie
wirówka	Eppendorf	Zobacz materiał 5810R
Bakteria E. coli			Zapas laboratoryjny
F-12k średni	Kontroler ATCC (Kontroler T	302004	Pożywka do hodowli komórkowych A549
Surowica bydlęca płodu	Corning	35-016-CV
L. monocytogenes			Kolekcje NIST
Fotometr OD600 DiluFotometr	NIEMOC
P. aeruginosa (P. aeruginosa)			Zapasy laboratoryjne dr Lori Burrows
P. aeruginosa ΔpilA			Zapasy laboratoryjne dr Lori Burrows
S. agalactiae (S. agalactiae)			Kolekcje NIST
S. aureus (złocist)	BEI (Biało-Wschodnia	NR-46543 (Zobacz materiał NR-46543
S. aureus ΔsaeR	BEI (Biało-Wschodnia	NR-48164 (wersja angielska)
S. rubidaea (S. rubidaea)			Kolekcje NIST
Typowy bulion sojowy	Growcells (Komórki do uprawy	MBPE-4040 (wersja angielska)

powiedział: ) ) ) )