Procedura wycinania ogona myszy w celu pobrania krwi obwodowej i izolacji osocza

Streszczenie

Źródło: Coats, J. S. et al., Ekspresja cytokin egzogennych w ksenoprzeszczepach pochodzących od pacjentów poprzez wstrzyknięcie z linią komórek zrębowych transdukowaną cytokinami. J. Vis. Exp. (2017)

W tym filmie demonstrujemy procedurę obcinania ogona na modelu myszy w celu pobrania krwi obwodowej. Pobrana krew jest następnie poddawana odwirowaniu w celu oddzielenia osocza, które można wykorzystać do dalszych eksperymentów.

Protokół

Wszystkie procedury związane z modelami zwierzęcymi zostały sprawdzone przez lokalny komitet ds. opieki nad zwierzętami oraz komisję weterynaryjną JoVE.

1. Seryjne pobieranie krwi i monitorowanie osocza pod kątem egzogennych cytokin ludzkich u myszy

1. Pobieranie krwi za pomocą nożyca ogonowego
   1. Zdezynfekuj kaptur bezpieczeństwa biologicznego i zmontuj ogranicznik myszy, nożyczki i inne narzędzia/materiały do zabiegu.
   2. Umieść mysz w ograniczniku i zabezpiecz rurkę, aby zminimalizować ruchy myszy.
   3. Zdezynfekuj ogon i nożyczki chirurgiczne alkoholem izopropylowym. Nałóż miejscowo krem znieczulający na ogon.
   4. Za pomocą bardzo ostrych nożyczek chirurgicznych odetnij około 0,5 - 1 mm czubka ogona myszy. Pobrać około 80 μl krwi obwodowej za pomocą heparynizowanych kapilarnek naczyń włosowatych.
      nuta: Jeśli krew będzie pobierana tą metodą więcej niż sześć razy, usunięcie ogona powinno być zachowawcze w odniesieniu do ilości usuniętego ogona. W miarę jak nożyce przesuwają się w górę ogona, średnica wzrasta, krwotok jest szybszy, a gojenie trwa dłużej.

2. Separacja plazmy

1. Przenieść krew za pomocą strzykawki z gruszką (w celu usunięcia jej z kapilary) do znakowanej probówki mikrotainera K₂EDTA; odwrócić 20 razy, aby zapobiec krzepnięciu.
   nuta: Zazwyczaj krzepnięcie krwi z uszczypnięcia ogona jest szybkie. Jeśli jednak krwotok utrzymuje się dłużej niż ~ 2 minuty, użyj ołówka/proszku ściągającego, aby wspomóc krzepnięcie.
2. Odwirować probówki do pobierania krwi zgodnie z instrukcją producenta i poddzielić osocze do przechowywania (-20 °C) do momentu, gdy będzie ono gotowe do dalszej analizy.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Wszczepialny nano transponder dla zwierząt z ka�ulą	Truban	ID-100B(1,25)
Krem znieczulający z lidokainą EMLA (otrzymywany przez recepturę w placówce opieki nad zwierzętami)	Nakaz	Nakaz
BD 1/2 cc LO-DOSE U-100 Strzykawka do insuliny 28G1/2	Bd	#329461
Probówki BD Microtainer z K2EDTA	Bd	#365974
wirówka	Beckman Coulter	Alegra X-15R
Rurki kapilarne FisherBrand (heparynizowane)	Fisher Naukowy	22-260-950
Hemocytometr	rybak	Numer katalogowy: 02-671-6
Analizator MACSQuant 10	Miltenyi Biotec	Numer katalogowy: 130-096-343
Klatka na ciasto myszy	Braintree Scientific, Inc.	Zobacz materiał MPC-1
Ogranicznik oświetlacza ogona myszy	Braintree Scientific, Inc.	MTI STD
Wszczepiacz uchwytu pistoletowego	Truban	IM-300(1,25)
"Myszy NSG" Skinienie głową. Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ, samiec lub suczka, wiek 6 – 8 tygodni	Myszy JAX	# 005557