Technika in vitro do wytwarzania apoptotycznych limfocytów T za pośrednictwem promieniowania UV

Streszczenie

Źródło: Hodge, M. X., et al. Ocena in vivo efferocytozy makrofagów pęcherzykowych po ekspozycji na ozon. J. Vis. Exp. (2019).

Ten film demonstruje metodę wywoływania apoptozy w komórkach Jurkata — linii komórkowej ludzkiej białaczki limfocytów T. Komórki są wystawione na działanie promieniowania ultrafioletowego C (UVC), które powoduje rozległe uszkodzenia DNA i prowadzi do apoptotycznej śmierci komórki.

Protokół

1. Przygotowanie linii komórek T Jurkat (Dzień 2)

UWAGA: Wszystkie procedury powinny być przeprowadzane w komorze bezpieczeństwa biologicznego klasy II.

1. Hodowla limfocytów T Jurkat w 24 ml podłoża do hodowli komórek bazowych + 10% FBS + 5% penicyliny/streptomycyny w temperaturze 37 °C + 5% CO₂ (tabela materiałów). Limfocyty T Jurkat to zawiesinowa linia komórkowa, którą można utrzymywać poprzez pasażowanie 1:6-1:8 do wstępnie ogrzanych pożywek hodowlanych co 3 dni. Nie potrząsać.
2. Aby przygotować komórki apoptotyczne, hoduj je do 90% zbiegu w każdej kolbie (c....

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Zestaw Annexin V-FITC	Trevigen	4830-250-TYS.	Zestaw TACS Annexin V-FITC umożliwia szybką, specyficzną i ilościową identyfikację apoptozy w poszczególnych komórkach przy użyciu cytometrii przepływowej.
Limfocyty T BCL2 Jurkat	Kontroler ATCC (Kontroler T	ATCC CRL-2899 (Kontroler ATCC) CRL-2899	Linia komórkowa BCL2 Jurkat została uzyskana przez transfekcję ludzkich limfocytów T Jurkat z wektorem ekspresyjnym pSFFV-neo ssaków zawierającym ludzką wstawkę BCL-2 ORF i gen oporny na neomycynę. Został przeznaczony do modeli pomiaru efferocytozy.
Hrabina II Automatyczny licznik komórek	Rybak termiczny	AMQAX1000	Jest to laboratoryjna platforma testowa wyposażona w najnowocześniejszą optykę, pełny autofokus i oprogramowanie do analizy obrazu do szybkiej oceny komórek w zawiesinie. Bardzo łatwy w użyciu.
Cytospin 4 Cytowirówka cytocentryczna	Rybak termiczny	A78300003	Zapewnia ekonomiczne cienkowarstwowe preparaty z dowolnej płynnej matrycy, zwłaszcza płynów hipokomórkowych, takich jak płyn z płukania oskrzelowo-pęcherzykowego.
Surowica bydlęca płodowa, kwalifikowana, inaktywowana termicznie	Rybak termiczny	16140071	Dostarcza składniki odżywcze do hodowanych komórek, aby mogły rosnąć. Jest to standard dla hodowli komórkowych.
Penicylina-Streptomycyna	Sigma/Aldrich	P0781-100ML	Penicylina-Streptomycyna jest najczęściej stosowanym roztworem antybiotyku do hodowli komórek ssaków. Dodatkowo służy do utrzymania sterylnych warunków podczas hodowli komórek.
RPMI 1640 Medium, suplement GlutaMAX	Rybak termiczny	61870036	RPMI 1640 Medium (Roswell Park Memorial Institute 1640 Medium) został pierwotnie opracowany do hodowli ludzkich komórek białaczkowych w zawiesinie i jako monowarstwa. Od tego czasu stwierdzono, że pożywka RPMI 1640 jest odpowiednia dla różnych komórek ssaków, w tym HeLa, Jurkat, MCF-7, PC12, PBMC, astrocytów i raków. Pomaga w szybkim i wydajnym wzroście limfocytów T Jurkata.
Stratagene UV Stratalinker 1800 UV Środek sieciujący UV	Uniwersytet Naukowy Cambridge	Numer katalogowy: 16659	Środek sieciujący UV Stratalinker jest przeznaczony do indukowania apoptozy, sieciowania DNA lub RNA do nylonu, nitrocelulozy lub membran nitrocelulozowych wzmocnionych nylonem.

powiedział: