Trójwymiarowe ilościowe obrazowanie fazowe w celu scharakteryzowania podtypów limfocytów

Abstract

Źródło: Yoon, J. et al. Bezznacznikowa identyfikacja podtypów limfocytów przy użyciu trójwymiarowego ilościowego obrazowania fazowego i uczenia maszynowego. J. Vis. Exp.(2018)

Ten film demonstruje bezznacznikową identyfikację morfologii i biochemii limfocytów za pomocą ilościowego obrazowania fazowego 3D. Technika ta pozwala na dokładną analizę limfocytów, odkrywanie ich wewnętrznych struktur i właściwości bez konieczności stosowania procedur znakowania.

Protocol

1. Cytometria przepływowa i sortowanie podtypów limfocytów

UWAGA: Sortowanie limfocytów w zależności od typu komórki jest niezbędne do ustalenia podstawowych (tj. prawidłowych) etykiet typów komórek do trenowania i testowania klasyfikatora typów komórek w nadzorowanym uczeniu. Cytometria przepływowa, złoty standard, służy do identyfikacji i separacji limfocytów.

1. Przygotować mieszaninę przeciwciał barwiących markery powierzchniowe w 100 μl świeżej pożywki RPMI-1640 [z 10% FBS, 0,1 μg CD3e (17A2), CD8a (53-6,7), CD19 (1D3), CD45R (B220, RA3-6B2) i NK1.1 (PK136)] oraz 0,25 μg przeciwciał CD4 (GK1,5) do doc....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Cytometria przepływowa	BD Nauki biologiczne	Aria II lub III
Komora obrazowania	Tomocube, Inc.	TomoDish
Holotomografia	Tomocube, Inc	HT-1H
Oprogramowanie do obrazowania holotomografii	Tomocube, Inc.	TomoStudio (Pracownia Górnicza)
Oprogramowanie do przetwarzania obrazu	MathWorks (Prace matematyczne)	Matlab R2017b
Stożkowa rurka wirówkowa Falcon	ThermoFisher Naukowy	14-959-53A	15 ml
Sól fizjologiczna buforowana fosforanami	Sigma-Aldrich	806544-500ML
Bufor lizujący chlorek amonu i potasu	ThermoFisher Naukowy	A1049201
RPMI-1640 średni	Sigma-Aldrich	Czynnik R8758
Surowica bydlęca płodu	ThermoFisher Naukowy	10438018