Wykrywanie czynnika Rh w próbkach krwi ludzkiej za pomocą lewitacji magnetycznej

Streszczenie

Źródło: Thompson, L. et al., Kwantyfikacja gęstości komórkowych i właściwości antygenowych za pomocą lewitacji magnetycznej.J. Vis. Exp.(2021)

Ten film demonstruje wykrywanie czynnika Rh (Rh) w próbkach krwi za pomocą przyrządu do lewitacji magnetycznej. Pole magnetyczne wyrównuje i lewituje koraliki i krwinki w zależności od gęstości. Traktowanie próbek przeciwciałami anty-Rh powoduje tworzenie kompleksów komórek perełkowych o średniej gęstości, co pozwala na różnicowanie Rh-dodatnich i Rh-ujemnych czerwonych krwinek.

Protokół

Wszystkie procedury z udziałem ludzi zostały przeprowadzone zgodnie z instytucjonalnymi, krajowymi i międzynarodowymi wytycznymi dotyczącymi dobrobytu ludzi i zostały sprawdzone przez lokalną komisję rewizyjną instytucji.

1. Konfiguracja instrumentu

UWAGA: Obrazowanie lewitujących komórek wymaga umieszczenia dwóch magnesów neodymowych ziem rzadkich namagnesowanych na osi z tym samym biegunem skierowanym do siebie w celu wytworzenia pola magnetycznego. Odległość między magnesami można dostosować w zależności od intensywności pola magnetycznego i gęstości celów. W tym przypadku magne....

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Kwas 2-(N-Morfolino)etanosulfonowy hydrat	Sigma Aldrich	Zobacz materiał M-2933	(MES); składnik bufora aktywacyjnego
Magnesy 50x2,5x1 mm, niklowane (Ni-Cu-Ni), gatunek N52, namagnesowane o grubości 5 mm (0,197")	K&J Magnetics	zwyczaj	Magnesy używane w urządzeniu do lewitacji magnetycznej
Uszczelniacz do rurek kapilarnych (Critoseal)	Mikrosystemy Leica	Numer katalogowy: 267620	Służy do zamykania końców rurek kapilarnych
Filtry probówkowe do wirówek (Corning Costar Spin-X)	Sigma Aldrich	CLS8163	Służy do prania koralików
Kompaktowe gniazdo laboratoryjne	Tholabs powiedział:	LJ750	Służy do regulacji urządzenia lewitacji magnetycznej
DPBS, bez wapnia, bez magnezu	Gibco (firma Gibco)	Nr kat. 14190-144	Rozwiązanie dla zawieszeń ściegów
Etanoloaminy	Sigma Aldrich	E9508-100ML	Używany na etapie mycia koralików
Fluorescencyjne barwienie błony plazmatycznej (CellMask Green)	Invitrogen	Zobacz materiał C37608	Służy do barwienia komórek Rh+
Wstrzyknięcie Gadoteridol	Technologia ProHance	NDC 0270-1111-03	Gadolin (Gd3+); roztwór magnetyczny stosowany do zawieszania komórek
HBSS++	Gibco (firma Gibco)	Numer katalogowy: 14025-092	Roztwór do przygotowania próbki
Kołnierz słupkowy z serii Mini	Tholabs powiedział:	Przekaźnik MSR2	Służy do mocowania urządzenia lewitacji magnetycznej do podnośników laboratoryjnych
Chlorowodorek N-(3-dimetyloaminopropylo)-N′-etylokarbodimidu	Sigma Aldrich	E1769-10G	(EDC); stosowany w reakcji sprzęgania przeciwciał
Normalna kontrola IgG królika	Systemy badawczo-rozwojowe	AB-105-C	Służy do powlekania koralików jako warunek kontrolny
sól fizjologiczna buforowana fosforanami (10X roztwór, pH 7,4)	Produkty biologiczne Boston	Zobacz materiał BM-220	Element bufora sprzęgającego, stosowany do etapów mycia
Polisorbat 20 (Animacja 20)	Sigma Aldrich	P7949-500ML	Składnik bufora aktywacyjnego
Polistyren Polimer karboksylowy	Laboratoria Bangs	PC06004	Kulki o górnej gęstości (1,05 g/ml), używane do sprzęgania przeciwciał
Królicze przeciwciało poliklonalne RhD	Invitrogen	PA5-112694	Służy do powlekania kulek w celu detekcji czynnika Rh w czerwonych krwinkach
Mikroskop klasy badawczej	Olympus	Provis AX-70	Mikroskop używany do montażu urządzenia do lewitacji magnetycznej i oglądania lewitujących komórek
Gumowe nóżki tłumiące	Tholabs powiedział:	Płyta RDF1	Służy do podparcia stołu z płytką stykową
Kwadratowe rurki Boro	Rurki VitroTube	8100-050	Rurka kapilarna używana do ładowania próbki do Maglev
Sulfo-NHS	Termonaukowy	Numer katalogowy: 24510	Stosowany w reakcji sprzęgania przeciwciał
Etap translacyjny	Tholabs powiedział:	Zobacz materiał PT1	Służy do ustawiania ostrości i skanowania rurki kapilarnej

powiedział: